| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 论文 | 第15-54页 |
| 第一章 盐生杜氏藻cbr基因的克隆 | 第15-21页 |
| 1 材料与方法 | 第15-16页 |
| ·材料 | 第15页 |
| ·实验用藻种、工程菌和克隆载体 | 第15页 |
| ·实验用试剂盒、工具酶和其它试剂 | 第15页 |
| ·引物和测序 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-16页 |
| ·盐生杜氏藻培养 | 第15页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的提取 | 第15-16页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因部分cDNA片段的克隆 | 第16页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因全长cDNA的构建 | 第16页 |
| 2 结果 | 第16-18页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的质量分析 | 第16-18页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因部分cDNA片段的克隆 | 第18页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因全长cDNA的构建 | 第18页 |
| 3 讨论 | 第18-21页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的提取 | 第19页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因部分cDNA片段的克隆 | 第19页 |
| ·盐生杜氏藻cbr基因全长cDNA的构建 | 第19-21页 |
| 第二章 渗透震扰对盐生杜氏藻cbr基因表达的影响 | 第21-27页 |
| 1 材料和方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·实验用藻种 | 第21页 |
| ·实验用试剂盒、工具酶和其它试剂 | 第21页 |
| ·引物合成 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-23页 |
| ·盐生杜氏藻的低渗、高渗震扰培养 | 第22页 |
| ·盐生杜氏藻总RNA的提取 | 第22页 |
| ·cDNA的合成 | 第22页 |
| ·半定量RT-PCR | 第22-23页 |
| 2 结果 | 第23页 |
| ·总RNA的提取 | 第23页 |
| ·半定量RT-PCR | 第23页 |
| 3 讨论 | 第23-27页 |
| ·内标的选择 | 第23-25页 |
| ·循环数的确定 | 第25-26页 |
| ·低渗、高渗震扰对盐生杜氏藻cbr基因的影响 | 第26-27页 |
| 第三章 盐生杜氏藻cbr基因农杆菌表达载体的构建 | 第27-33页 |
| 1 材料和方法 | 第27-30页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·酶与试剂盒 | 第27页 |
| ·引物及测序 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·载体pCAMBIA2301G的构建 | 第27-28页 |
| ·载体pCAMBIA2301G-cbr的构建 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法感受态细胞的制备及转化 | 第29页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29页 |
| ·用PCR方法检测连接子 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-31页 |
| ·载体pCAMBIA2301G的构建 | 第30-31页 |
| ·载体pCAMBIA2301G-cbr的构建 | 第31页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 盐生杜氏藻cbr基因转化烟草及植株再生 | 第33-40页 |
| 1 材料和方法 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·根癌农杆菌菌株 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·农杆菌的培养 | 第33-34页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第34页 |
| ·诱导丛生芽 | 第34-35页 |
| ·诱导生根 | 第35页 |
| ·无菌苗的继代培养 | 第35页 |
| ·再生植株的移栽 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-36页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第35-36页 |
| ·诱导丛生芽 | 第36页 |
| ·诱导生根 | 第36页 |
| ·移栽 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-40页 |
| ·农杆菌的培养 | 第36-38页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第38页 |
| ·诱导丛生芽 | 第38-39页 |
| ·诱导生根 | 第39页 |
| ·移栽 | 第39-40页 |
| 第五章 转盐生杜氏藻cbr基因烟草的分子生物学鉴定 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·酶与试剂盒 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·CTAB法小量抽提植物总DNA | 第41-42页 |
| ·CTAB法大量抽提植物总DNA | 第42页 |
| ·RNA的提取 | 第42页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第42-43页 |
| ·Southern杂交 | 第43-45页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| ·PCR检测 | 第46页 |
| ·Southern杂交 | 第46-48页 |
| ·总DNA的质量检测 | 第46页 |
| ·总DNA酶切、电泳及浓缩 | 第46-47页 |
| ·探针的标记 | 第47页 |
| ·Southern杂交结果 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR检测 | 第48-49页 |
| ·总RNA电泳检测 | 第48页 |
| ·RT-PCR检测 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| ·PCR检测 | 第49页 |
| ·Southern杂交 | 第49-51页 |
| ·DNA样品的制备 | 第49-50页 |
| ·电泳、转膜和固定 | 第50页 |
| ·预杂交和杂交 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR检测 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 综述 | 第54-71页 |
| 类胡萝卜素的基因工程及生物学功能研究进展 | 第54-71页 |
| 一、 类胡萝卜素的生物合成途径及相关基因的克隆 | 第54-61页 |
| 1 类胡萝卜素的生物合成途径 | 第56页 |
| 2 类胡萝卜素的生物合成相关基因的克隆 | 第56-61页 |
| ·GGPS | 第56-57页 |
| ·PSY | 第57页 |
| ·PDS和ZDS | 第57-58页 |
| ·LYC | 第58页 |
| ·涉及叶黄素合成的酶 | 第58-61页 |
| 二、 类胡萝卜素的基因工程 | 第61-66页 |
| 1 微生物类胡萝卜素生物合成的基因工程 | 第61-64页 |
| ·大肠杆菌 | 第61-62页 |
| ·酵母 | 第62-64页 |
| 2 植物类胡萝卜素生物合成的基因工程 | 第64-66页 |
| ·水稻 | 第64页 |
| ·油菜 | 第64-65页 |
| ·番茄 | 第65页 |
| ·烟草 | 第65-66页 |
| 三、 类胡萝卜素的生物学功能 | 第66-70页 |
| 1 参与光系统的组装 | 第66页 |
| 2 参与非光化学淬灭 | 第66-67页 |
| 3 具有抗氧化的功能 | 第67-68页 |
| 4 维持生物膜的稳定性 | 第68页 |
| 5 是维生素A的前体 | 第68-69页 |
| 6 具有增强免疫力、预防癌症的功能 | 第69页 |
| 7 促进细胞间的缝间联接交流 | 第69-70页 |
| 四、 结语 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |