| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 HCV C抗原表位基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性 | 第18-38页 |
| 一、实验材料 | 第18-19页 |
| 二、实验方法 | 第19-24页 |
| 1.HCV C区抗原表位基因的设计及合成 | 第20页 |
| 2.重组pET-RNA-C抗原表位呈递表达系统的构建 | 第20页 |
| 3.重组pET-RNA-C抗原表位基因在大肠杆菌中的表达 | 第20-21页 |
| 4.重组蛋白的Western Blot检测 | 第21-22页 |
| 5.重组pET-RNA-C抗原的纯化制备 | 第22-24页 |
| 三、结果 | 第24-34页 |
| 1.重组质粒pET-RNA-C1、pET-RNA-C2的酶切鉴定及序列分析 | 第24页 |
| 2.重组pET-RNA-C抗原表位基因在大肠杆菌中的表达 | 第24页 |
| 3.重组pET-RNA-C抗原的纯化制备 | 第24-29页 |
| 4.动物实验及免疫学检测 | 第29-34页 |
| ·Western Blot | 第29-31页 |
| ·ELISA | 第31-34页 |
| 四、讨论 | 第34-38页 |
| 第二部分 HCV E1区部分基因片段在大肠杆菌中的表达及其免疫原性 | 第38-52页 |
| 一、实验材料 | 第38-39页 |
| 二、实验方法 | 第39-42页 |
| 1.HCV E1区部分基因片段的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.重组原核表达载体pET-HCV-Eb的构建 | 第40页 |
| 3.重组质粒pET-HCV-Eb在大肠杆菌中的表达及表达条件优化 | 第40页 |
| 4.重组蛋白的纯化制备 | 第40-41页 |
| 5.重组HCV-Eb蛋白的Western Blot检测 | 第41-42页 |
| 三、结果 | 第42-50页 |
| 1.HCV E1区部分基因片段的PCR扩增 | 第43页 |
| 2.重组质粒pET-HCV-Eb的酶切鉴定及序列测定 | 第43-44页 |
| 3.重组质粒pET-HCV-Eb在大肠杆菌中的表达及表达条件优化 | 第44页 |
| 4.重组蛋白的纯化制备 | 第44-46页 |
| 5.重组HCV-Eb蛋白的Western Blot检测 | 第46-50页 |
| 四、讨论 | 第50-52页 |
| 第三部分 重组HCV E1区单个及其串联抗原表位基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性 | 第52-92页 |
| 一、实验材料 | 第52-53页 |
| 二、实验方法 | 第53-62页 |
| 1.HCV E1区抗原表位基因的设计及合成 | 第53-54页 |
| 2.重组pET-RNA-E1抗原表位呈递表达系统的构建 | 第54-59页 |
| ·单一表位重组质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·串联表位RNA-E-E重组质粒的构建 | 第55-59页 |
| 3.各单一表位及串联表位重组质粒在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化 | 第59页 |
| 4.重组蛋白的纯化制备 | 第59-60页 |
| 5.单一表位及串联表位重组抗原的抗原性 | 第60-61页 |
| ·Western Blot | 第60页 |
| ·ELISA | 第60-61页 |
| 6.单一表位及串联表位重组抗原的动物免疫实验及免疫原性研究 | 第61-62页 |
| ·豚鼠免疫实验 | 第61页 |
| ·免疫原性研究 | 第61-62页 |
| 三、结果 | 第62-87页 |
| 1.重组pET-RNA-E1抗原表位呈递表达系统的构建 | 第62-75页 |
| ·单一表位重组质粒的鉴定 | 第62-67页 |
| ·串联表位RNA-E-E重组质粒的鉴定 | 第67-75页 |
| 2.各单一表位及串联表位重组质粒在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化 | 第75-76页 |
| 3.重组蛋白的纯化制备 | 第76-80页 |
| 4.单一表位及串联表位重组抗原的抗原性研究 | 第80-83页 |
| ·Western Blot | 第80-82页 |
| ·ELISA | 第82-83页 |
| 5.单一表位及串联表位重组抗原的动物免疫实验及免疫原性研究 | 第83-87页 |
| ·豚鼠免疫实验 | 第83-84页 |
| ·免疫原性 | 第84-87页 |
| 四、讨论 | 第87-92页 |
| 小结 | 第92-94页 |
| 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 综述 | 第99-118页 |
| 综述参考文献 | 第112-118页 |
| 附录 | 第118-127页 |
| 作者简历 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
