| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| ·A.ferrooxidans菌ISC系统介绍 | 第10-13页 |
| ·铁氧还蛋白Fdx(ferredoxin) | 第11-12页 |
| ·核心蛋白IscA、IscS、IscU | 第12页 |
| ·调控蛋白IscR和分子伴侣蛋白HscB、HscA | 第12-13页 |
| ·铁硫簇的结构、功能及生物合成 | 第13-21页 |
| ·铁硫簇的结构、功能 | 第13-15页 |
| ·铁硫簇的生物合成 | 第15-16页 |
| ·NIF、ISC、SUF三个系统中铁硫簇的生物合成 | 第16-21页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第21-23页 |
| ·依据和目的 | 第21-22页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第22页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-32页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·A.ferrooxidans菌基因组抽提试剂 | 第23-24页 |
| ·质粒提取试剂 | 第24页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第25页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM 1 | 第26页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第26页 |
| ·转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第27页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第27-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第28-29页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第29页 |
| ·定点突变 | 第29-30页 |
| ·引物的设计 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第30页 |
| ·测试分析方法 | 第30-32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第30页 |
| ·电子顺磁共振(EPR) | 第30-31页 |
| ·基质辅助激光解吸串联分行时间质谱(MALDI-TOF) | 第31-32页 |
| 第三章 铁氧还蛋白的基因克隆、表达、纯化及定点突变 | 第32-41页 |
| ·铁氧还蛋白基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·铁氧还蛋白基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33-34页 |
| ·铁氧还蛋白的表达 | 第34-38页 |
| ·铁氧还蛋白表达条件的确定 | 第34页 |
| ·铁氧还蛋白大规模的表达 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE分析铁氧还蛋白 | 第34-35页 |
| ·基质辅助激光解吸—飞行时间质谱(MALDI-TOF) | 第35页 |
| ·UV/Vis分析铁氧还蛋白 | 第35-36页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR)分析铁氧还蛋白 | 第36页 |
| ·分子模拟铁氧还蛋白 | 第36-38页 |
| ·铁氧还蛋白C42、C48、C51、C87定点突变 | 第38-40页 |
| ·铁氧还蛋白定点突变 | 第38页 |
| ·突变蛋白质的表达、纯化 | 第38页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第38-39页 |
| ·突变蛋白质的UV/Vis分析 | 第39-40页 |
| ·突变蛋白的EPR分析 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 铁氧还蛋白氧化还原酶(Ferredoxin:NADP~+ oxidoreductase,FNR)的基因克隆、表达与纯化 | 第41-45页 |
| ·FNR蛋白基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·FNR基因的克隆 | 第41页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第41-43页 |
| ·FNR蛋白的表达 | 第43页 |
| ·FNR蛋白表达条件的确定 | 第43页 |
| ·FNR蛋白大规模的表达 | 第43页 |
| ·FNR蛋白纯化样品的SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第五章 铁氧还蛋白铁硫簇体外组装机理的初步研究 | 第45-50页 |
| ·Apo-ferredoxin的准备 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·Apo-ferredoxin的获得 | 第45页 |
| ·铁硫簇的组装 | 第45页 |
| ·Apo-及Holo-形式蛋白UV/Vis分析 | 第45-46页 |
| ·组装蛋白的电子顺磁共振波谱(EPR)分析 | 第46页 |
| ·铁氧还蛋白可能的铁硫簇组装模型 | 第46-48页 |
| ·IscS的失活破坏铁氧还蛋白体内[Fe_2S_2]的组装 | 第47-48页 |
| ·铁氧还蛋白可能的铁硫簇组装模型 | 第48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第六章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 研究成果 | 第60页 |
