| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 前言 | 第13-34页 |
| 1 琼胶与琼胶酶 | 第13-26页 |
| ·琼胶 | 第13-14页 |
| ·琼胶酶 | 第14-26页 |
| ·琼胶酶的来源 | 第14-15页 |
| ·琼胶酶的分类 | 第15-16页 |
| ·琼胶酶的研究现状 | 第16-19页 |
| ·琼胶酶的作用机理 | 第19-20页 |
| ·琼胶酶的催化区和碳水化合物结合区的晶体结构的研究 | 第20-22页 |
| ·琼胶酶的应用 | 第22-26页 |
| 2 蛋白质的结构和功能的关系 | 第26-29页 |
| 3 定点突变 | 第29-32页 |
| ·寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第29-30页 |
| ·PCR介导的定点突变法及其改进——大引物突变法 | 第30-31页 |
| ·盒式突变 | 第31页 |
| ·三种方法的优缺点比较 | 第31-32页 |
| ·寡核苷酸引物介导的定点突变法 | 第31页 |
| ·PCR介导的定点突变法 | 第31-32页 |
| ·盒式突变 | 第32页 |
| 4 前期工作与展望 | 第32-34页 |
| 第一章 琼胶酶β-AgaA的结构研究 | 第34-57页 |
| 1 实验工具和实验方法 | 第34-43页 |
| ·部分模板分子的结构和功能分析 | 第34-37页 |
| ·模板分子中104Y和104Z介绍 | 第34-35页 |
| ·模板分子中1URX的介绍 | 第35-37页 |
| ·序列相似性搜索-BLASTp | 第37页 |
| ·模体搜索 | 第37-38页 |
| ·多重序列比对ClustalW | 第38-40页 |
| ·ESpript(Easy Sequencing in Postscript)和疏水簇分析(hydrophobic cluster analysis,HCA)比对 | 第40-42页 |
| ·SWISS-Model(www.expasy.org/swissmod/SWISS-MLDEL.html)模拟构建β-AgaA的结构 | 第42-43页 |
| ·AutoDock和Ligplot分析酶与底物形成氢键和疏水作用的残基 | 第43页 |
| 2 实验结果 | 第43-55页 |
| ·序列相似性搜索-BLASTp | 第44-45页 |
| ·BLASTp对SWISS-PROT蛋白序列数据库搜索结果 | 第44页 |
| ·BLASTp对布鲁克海文PDB蛋白结构数据库搜索结果 | 第44-45页 |
| ·保守结构域(conserved domain)搜索 | 第45-46页 |
| ·多重序列比对ClustalW | 第46-48页 |
| ·ESpript(Easy Sequencing in Postscript)和疏水簇分析(hydrophobic cluster analysis,HCA)比对 | 第48-51页 |
| ·根据模拟的三维结构预测关键氨基酸位点 | 第51-53页 |
| ·AutoDock和Ligplot分析酶和底物的对位信息 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 第二章 氨基酸突变实验 | 第57-66页 |
| 1 材料与仪器 | 第57-59页 |
| ·仪器 | 第57-58页 |
| ·菌株与质粒 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-64页 |
| ·大引物PCR法定点突变 | 第59-60页 |
| ·PCR引物设计 | 第60页 |
| ·PCR介导的定点突变 | 第60页 |
| ·QuikChange定点突变 | 第60-62页 |
| ·引物设计 | 第61-62页 |
| ·定点突变反应 | 第62页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·突变产物的转化 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 第三章 突变体酶性质的研究 | 第66-77页 |
| 1 材料与仪器 | 第66-68页 |
| ·仪器 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66-67页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第67-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| ·突变体酶的表达 | 第68页 |
| ·DNS法测定突变体发酵液上清酶活筛选 | 第68页 |
| ·突变体酶的分离纯化 | 第68-69页 |
| ·突变体酶比活力的测定 | 第69-70页 |
| ·突变体酶降解产物的鉴定 | 第70-71页 |
| ·突变体酶的其它生化性质 | 第71页 |
| 3 实验结果 | 第71-75页 |
| ·突变体的纯化 | 第71-73页 |
| ·突变体的比活力 | 第73页 |
| ·突变体酶降解琼脂糖的产物分析 | 第73-75页 |
| ·突变体酶的其它生化性质 | 第75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 总结与展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文 | 第88页 |
