| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-43页 |
| 1 二化螟抗性研究概况 | 第13-19页 |
| ·二化螟分布及为害 | 第13-16页 |
| ·二化螟化学防治与抗药性 | 第16-19页 |
| 2 昆虫对杀虫剂的代谢抗性研究进展 | 第19-23页 |
| ·酯酶抗性研究进展 | 第19-21页 |
| ·酯酶基因的过表达 | 第19-20页 |
| ·酯酶基因突变 | 第20-21页 |
| ·多功能氧化酶系抗性研究进展 | 第21-23页 |
| ·谷胱甘肽S-转移酶抗性研究进展 | 第23页 |
| 3 昆虫对杀虫剂的靶标抗性研究进展 | 第23-42页 |
| ·γ-氨基丁酸受体 | 第24-25页 |
| ·钠离子通道 | 第25-28页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体 | 第28-29页 |
| ·乙酰胆碱酯酶 | 第29-42页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的高级结构 | 第29-31页 |
| ·AChE高级结构中影响底物结合的相关位点 | 第31-34页 |
| ·AChE的酶动力学参数 | 第34-35页 |
| ·乙酰胆碱酯酶与昆虫抗药性 | 第35-41页 |
| ·昆虫体内的乙酰胆碱酯酶 | 第41-42页 |
| 4 二化螟对三唑磷靶标抗性机理研究的目的和意义 | 第42-43页 |
| 第二章 二化螟乙酰胆碱酯酶基因的克隆 | 第43-51页 |
| 1 材料和方法 | 第44-47页 |
| ·供试二化螟及饲养 | 第44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第44页 |
| ·总RNA提取和RT-PCR | 第44-45页 |
| ·引物 | 第45页 |
| ·PCR和RACE | 第45页 |
| ·PCR产物纯化 | 第45-46页 |
| ·质粒载体的连接反应和转化 | 第46页 |
| ·连接反应 | 第46页 |
| ·转化反应和细菌培养 | 第46页 |
| ·质粒DNA测序及序列分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-50页 |
| ·二化螟乙酰胆碱酯酶基因的克隆 | 第47页 |
| ·二化螟乙酰胆碱酯酶的序列分析 | 第47-49页 |
| ·二化螟AChEs与其它鳞翅目昆虫的同源性 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 二化螟抗三唑磷品系乙酰胆碱酯酶的点突变分析 | 第51-59页 |
| 1 材料和方法 | 第52-54页 |
| ·供试二化螟 | 第52页 |
| ·供试药剂 | 第52-53页 |
| ·生物测定方法 | 第53页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第53页 |
| ·总RNA提取和RT-PCR | 第53页 |
| ·PCR扩增及产物克隆、测序与序列分析 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·抗性筛选及毒力测定 | 第54页 |
| ·二化螟抗感品系AChEs氨基酸比对 | 第54-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 不同二化螟地理种群对三唑磷靶标抗性的分子检测 | 第59-67页 |
| 1 材料和方法 | 第60-62页 |
| ·供试二化螟 | 第60页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第60页 |
| ·二化螟基因组DNA的提取 | 第60-61页 |
| ·二化螟基因组DNA片段克隆 | 第61-62页 |
| ·PCR产物的酶切反应及检测 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-65页 |
| ·RFLP-PCR检测点突变方法的确立 | 第62-63页 |
| ·RFLP-PCR对不同地理种群的检测 | 第63-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 二化螟两个乙酰胆碱酯酶基因的相对表达量以及体外真核表达分析 | 第67-87页 |
| 1 材料和方法 | 第68-78页 |
| ·菌种与载体 | 第68页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第68-69页 |
| ·二化螟两个乙酰胆碱酯酶基因的相对定量分析 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量PCR模板的准备 | 第69页 |
| ·引物设计 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第70页 |
| ·AChE基因mRNA表达量的比较 | 第70页 |
| ·二化螟乙酰胆碱酯酶基因真核表达实验方法 | 第70-78页 |
| ·二化螟乙酰胆碱酯酶基因真核表达供体质粒构建 | 第70-72页 |
| ·定点突变 | 第72-73页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第73页 |
| ·重组病毒的构建 | 第73-75页 |
| ·重组病毒Bacmid DNA对昆虫细胞的的转染及感染 | 第75-76页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第76-77页 |
| ·Western blotting | 第77页 |
| ·蛋白质从凝胶转移至PVDF膜 | 第77页 |
| ·杂交与检测 | 第77页 |
| ·酶活测定 | 第77-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-84页 |
| ·实时定量PCR产物熔解曲线分析 | 第78-79页 |
| ·二化螟AChE1和AChE2基因相对表达量分析 | 第79页 |
| ·供体质粒构建 | 第79-80页 |
| ·定点突变分析 | 第80-81页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid的获得 | 第81-82页 |
| ·重组Bacmid感染Tn细胞 | 第82页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第82-83页 |
| ·Western blotting分析 | 第83页 |
| ·表达产物的生物活性分析 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-87页 |
| 全文总结 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-105页 |
| 附录:攻读学位期间发表的学术论文以及专利申请 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
