| 摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第7-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-25页 |
| 1. 细胞凋亡 | 第15-18页 |
| 2. 自噬 | 第18-22页 |
| 3. NGAL | 第22-24页 |
| 4. NGAL、细胞凋亡与自噬的关系 | 第24-25页 |
| 第2章 NGAL 蛋白的酵母表达与纯化 | 第25-49页 |
| 第1节 重组NGAL 酵母表达载体的构建 | 第25页 |
| 第2节 酵母表达的NGAL 蛋白的纯化 | 第25-49页 |
| ·前言 | 第25-29页 |
| ·NGAL 蛋白纯化方案 | 第29-30页 |
| ·材料与方法 | 第30-34页 |
| ·NGAL 蛋白重组表达酵母的培养与诱导 | 第30页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第30页 |
| ·Bio-gel P-30 凝胶过滤层析 | 第30页 |
| ·SP-Sepharose fast flow 阳离子交换层析 | 第30-31页 |
| ·High Q Support 阴离子交换层析 | 第31页 |
| ·除盐与保存 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·Western blotting | 第32-33页 |
| ·等电聚焦电泳 | 第33页 |
| ·Bradford 法蛋白含量的测定 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-43页 |
| ·硫酸铵盐析重组表达 NGAL 蛋白的酵母上清液中的蛋白组分 | 第34-36页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第36-37页 |
| ·阳离子交换层析 | 第37-38页 |
| ·阴离子交换层析 | 第38-39页 |
| ·不同纯化方案的比较 | 第39-40页 |
| ·NGAL 蛋白的稳定性与纯化 | 第40页 |
| ·除盐与保存 | 第40页 |
| ·NGAL 蛋白纯度的检测 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| ·仪器与试剂 | 第43-49页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·试剂配制 | 第44-49页 |
| 第3章 NGAL 蛋白对食管癌细胞的体外诱导作用 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·实验研究方案 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-53页 |
| ·细胞与细胞培养 | 第51页 |
| ·免疫荧光染色检测 NGALR 定位表达 | 第51页 |
| ·NGAL 蛋白的荧光标记及其细胞内吞实验 | 第51页 |
| ·细胞形态学观察 | 第51页 |
| ·细胞自噬体的特异性标记与观察 | 第51页 |
| ·细胞自噬特异性蛋白LC3 的表达分布检测 | 第51-52页 |
| ·检测细胞内铁离子浓度 | 第52页 |
| ·免疫印记检测相关蛋白表达水平 | 第52页 |
| ·RT-PCR 检测细胞自噬相关基因转录水平 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-61页 |
| ·食管癌细胞表达NGALR 及其NGAL 蛋白内吞 | 第53-54页 |
| ·NGAL 蛋白诱导食管癌细胞形态改变 | 第54-55页 |
| ·NGAL 蛋白诱导食管癌细胞发生自噬 | 第55-57页 |
| ·NGAL 蛋白对食管癌细胞内铁离子与铁蛋白水平的影响 | 第57-59页 |
| ·NGAL 蛋白激活食管癌细胞的ERK1 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·仪器与试剂 | 第63-65页 |
| ·主要仪器 | 第63-64页 |
| ·主要试剂 | 第64-65页 |
| 本文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
