| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章、前言 | 第13-19页 |
| 1 水稻条纹病毒的研究现状 | 第13-15页 |
| ·水稻条纹叶枯病的发生和流行 | 第13页 |
| ·水稻条纹叶枯病传毒介体灰飞虱传毒机制 | 第13页 |
| ·RSV 的基因组结构与功能 | 第13-14页 |
| ·RSV 与寄主的互作情况 | 第14-15页 |
| 2 酵母双杂交系统原理及其用途（引自第四军医大学李静硕士学位论文） | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交系统的主要用途 | 第16页 |
| 3 免疫共沉淀技术的原理 | 第16-17页 |
| 4 荧光定量PCR 在检测基因表达情况方面的应用 | 第17页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章、材料与方法 | 第19-33页 |
| 1 酵母双杂交验证NSvc4 与NB2, SP 与SB16 蛋白的互作 | 第19-25页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-25页 |
| ·水稻叶片总RNA 的提取（Trizol 法） | 第19-20页 |
| ·NB2、SB16 基因RT-PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·NB2、SB16 基因片段的检测与回收 | 第21页 |
| ·NB2、SB16 基因PCR 回收产物和T 载体的连接 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备和转化 | 第21-22页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| ·NB2 和SB16 基因酵母双杂交载体的构建 | 第23-24页 |
| ·酵母双杂交检测NSvc4 和NB2 蛋白,SP 和SB16 蛋白两两互作情况 | 第24-25页 |
| 2 免疫共沉淀进一步验证NSvc4 与NB2, SP 与SB16 蛋白互作 | 第25-29页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·注射用烟草 | 第25页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·HA-NB2、HA-SB16 基因PCR 扩增和检测回收 | 第26页 |
| ·HA-NB2、HA-SB16 基因的克隆和鉴定 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第27页 |
| ·植物表达载体在烟草叶片中表达 | 第27-28页 |
| ·植物蛋白提取 | 第28页 |
| ·用抗体免疫沉淀互作蛋白 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·Western blot 检测蛋白互作 | 第29页 |
| 3 利用荧光定量PCR 技术检测NB2 基因mRNA 的表达情况 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·供试材料 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第29-30页 |
| ·RNA 的分离和质量检测以及cDNA 的获得 | 第30页 |
| ·最佳Tm 值的确定 | 第30页 |
| ·目的基因NB2 和内标基因Actin 标准曲线建立 | 第30-31页 |
| ·确定不同样品中目的基因NB2 的相对表达量 | 第31页 |
| 4 酵母双杂交技术确定水稻条纹病毒CP 外壳蛋白自身互作的活性部位 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·目的基因CP-N，CP-M,CP-C 的PCR 扩增 | 第31页 |
| ·扩增产物CP-N，CP-M, CP-C 的检测和回收 | 第31页 |
| ·目的基因CP-N，CP-M,CP-C 的克隆载体构建 | 第31-32页 |
| ·目的基因CP-N，CP-M,CP-C 酵母双杂交载体的构建 | 第32页 |
| ·CP-N、CP-M 和CP-C 蛋白自激活活性检测 | 第32页 |
| ·酵母双杂交确定外壳蛋白CP 自身互作的活性中心 | 第32-33页 |
| 第三章、结果与分析 | 第33-50页 |
| 1 酵母双杂交验证NSvc4 与NB2, SP 与SB16 蛋白的互作 | 第33-37页 |
| ·NB2、SB16 基因的RT-PCR 扩增 | 第33页 |
| ·NB2、SB16 基因重组克隆载体的PCR 和酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·NB2、SB16 基因酵母表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·NSvc4 与NB2，SP 与SB16 蛋白在酵母中的互作情况检测 | 第35-37页 |
| 2 免疫共沉淀进一步验证NSvc4 与NB2, SP 与SB16 蛋白互作 | 第37-41页 |
| ·HA-NB2、HA-SB16 基因的PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·HA-NB2、HA-SB16 基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·植物瞬时表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·蛋白互作情况的检测 | 第40-41页 |
| 3 利用荧光定量PCR 技术检测NB2 基因mRNA 的表达情况 | 第41-44页 |
| ·水稻样品总RNA 的质量 | 第41页 |
| ·目的基因NB2 和内参基因Actin 最佳退火温度的确定 | 第41-42页 |
| ·目的基因NB2 和内参基因Actin 的标准曲线 | 第42-43页 |
| ·目的基因NB2 和内参基因Actin 的原始定量 | 第43页 |
| ·目的基因NB2 的相对定量 | 第43-44页 |
| 4 酵母双杂交技术确定水稻条纹病毒CP 外壳蛋白自身互作的活性部位 | 第44-50页 |
| ·CP-N、CP-M 和CP-C 基因的PCR 扩增 | 第44页 |
| ·CP-N、CP-M 和CP-C 基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·CP-N、CP-M 和CP-C 基因酵母表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·CP-N、CP-M 和CP-C 蛋白自激活活性检测 | 第46-47页 |
| ·酵母双杂交确定外壳蛋白 CP 自身互作的活性中心 | 第47-50页 |
| 第四章、问题与讨论 | 第50-54页 |
| ·酵母双杂交以及免疫共沉淀验证 NSvc4 与 NB2, SP 与 SB16 蛋白的互作 | 第50-51页 |
| ·利用荧光定量 PCR 技术检测 NB2 基因 mRNA 的表达情况 | 第51-52页 |
| ·酵母双杂交技术确定水稻条纹病毒 CP 外壳蛋白自身互作的活性部位 | 第52-54页 |
| 第五章、全文总结与展望 | 第54-56页 |
| 攻硕期间发表及(拟)投稿的文章 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录和附表 | 第64-71页 |
| 附表一 本研究所用引物序列 | 第64-65页 |
| 附录二 本研究所用的试剂与溶液的配制 | 第65-68页 |
| 附录三 缩写词解释 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
