| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-17页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·禽流感病毒的基本特点 | 第10-12页 |
| ·禽流感病毒的组成 | 第10-11页 |
| ·禽流感病毒的多型性 | 第11页 |
| ·禽流感病毒的形态结构 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒的抗性 | 第12页 |
| ·禽流感病毒的蛋白功能 | 第12-14页 |
| ·表面糖蛋白血凝素 | 第12页 |
| ·表面糖蛋白神经氨酸酶 | 第12-13页 |
| ·核蛋白 | 第13页 |
| ·RNA聚合酶 | 第13页 |
| ·基质蛋白 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14页 |
| ·禽流感病毒的复制 | 第14-15页 |
| ·病毒的脱壳 | 第14页 |
| ·病毒基因组的转录、复制 | 第14-15页 |
| ·病毒粒子的装配与释放 | 第15页 |
| ·禽流感病毒PA蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| ·PA蛋白的功能 | 第15页 |
| ·PA蛋白的结构 | 第15-16页 |
| ·本论文研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 H5N1型禽流感病毒PA突变体基因的克隆及原核表达 | 第17-29页 |
| ·材料与方法 | 第17-22页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·细菌菌株 | 第17页 |
| ·载体及质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·溶液配制 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| ·PA缺失突变体基因的克隆 | 第20页 |
| ·H5N1型病毒的PA缺失突变体的原核表达 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的Western-blotting检测 | 第21-22页 |
| ·结果 | 第22-26页 |
| ·PA缺失突变体基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·H5N1型病毒PA缺失突变体的表达 | 第23-25页 |
| ·重组蛋白的Western-blotting检测 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 PA相互作用蛋白的筛选 | 第29-49页 |
| ·材料与方法 | 第29-36页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌株及质粒 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·酶类、试剂及试剂盒 | 第30页 |
| ·溶液配制 | 第30-32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·酵母双杂交流程 | 第32-33页 |
| ·酵母双杂交系统的建立 | 第33-34页 |
| ·杂交控制试验 | 第33页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·酵母的转化 | 第34页 |
| ·诱饵质粒毒性及自激活性的验证 | 第34页 |
| ·人肝组织cDNA文库的筛选 | 第34页 |
| ·阳性质粒的分离 | 第34-35页 |
| ·插入片段的PCR扩增 | 第35页 |
| ·相互作用蛋白的验证 | 第35页 |
| ·阳性克隆cDNA的测序及其序列同源性检索 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-45页 |
| ·诱饵蛋白的毒性及转录自激活性分析 | 第36页 |
| ·文库筛选结果 | 第36-37页 |
| ·插入片段的PCR分析 | 第37页 |
| ·回交验证相互作用 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的生物信息学分析 | 第38-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 相互作用蛋白全长基因的克隆及表达载体构建 | 第49-61页 |
| ·材料与方法 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·细胞系、菌株 | 第49页 |
| ·质粒载体 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·相互作用蛋白全长基因的PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第52-53页 |
| ·PCR产物回收 | 第52页 |
| ·连接及转化 | 第52-53页 |
| ·质粒的提取及测序 | 第53页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第54页 |
| ·重组质粒在肺腺癌细胞A549中的表达 | 第54页 |
| ·细胞转染 | 第54页 |
| ·蛋白表达的Western-blotting检测 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-59页 |
| ·相互作用蛋白全长基因的PCR扩增 | 第54-57页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第58页 |
| ·重组质粒在肺腺癌细胞A549中的表达 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |