| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 IFN-γ研究进展 | 第10-19页 |
| ·IFN-γ的发现 | 第10页 |
| ·IFN-γ的产生及分子结构 | 第10-12页 |
| ·IFN-γ受体及作用机制 | 第12-14页 |
| ·IFN-γ主要生物学功能 | 第14-16页 |
| ·抗病毒作用 | 第14页 |
| ·免疫调节作用 | 第14-15页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第15-16页 |
| ·IFN-γ的基因工程研究进展 | 第16-17页 |
| ·IFN-γ在动物疾病防控中的作用 | 第17-18页 |
| ·存在的问题和展望 | 第18-19页 |
| 第二章 秦岭大熊猫的进化史等研究进展 | 第19-24页 |
| ·秦岭大熊猫的进化史 | 第19-20页 |
| ·秦岭大熊猫形态特征 | 第20页 |
| ·秦岭大熊猫生活习性 | 第20-21页 |
| ·秦岭大熊猫分布地域 | 第21页 |
| ·秦岭大熊猫分子学研究进展 | 第21页 |
| ·秦岭大熊猫保护措施 | 第21-22页 |
| ·大熊猫疾病研究概况 | 第22页 |
| ·大熊猫IFN-γ研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第三章 秦岭大熊猫IFN-γ基因原核表达载体的构建 | 第24-45页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·菌种和载体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要溶液配方 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-37页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| ·秦岭大熊猫外周血淋巴细胞的分离与诱导培养 | 第28页 |
| ·淋巴细胞总RNA 的提取及第一链cDNA 的合成 | 第28页 |
| ·PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第30页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·菌液PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第35页 |
| ·重组菌最佳诱导条件的确定 | 第35-36页 |
| ·表达产物的检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-42页 |
| ·RT-nested PCR 扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒pGEM-T-IFN-γ的测序结果与序列分析结果 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体pET32a-IFN-γ的鉴定 | 第38-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第40-41页 |
| ·表达条件的优化 | 第41页 |
| ·Western blot 分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·秦岭大熊猫IFN-γ基因的扩增 | 第42页 |
| ·秦岭大熊猫IFN-γ基因表达重组质粒的构建 | 第42页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·表达条件的优化 | 第43页 |
| ·重组蛋白的大小及表达量 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的反应原性鉴定 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第四章 IFN-γ重组蛋白的纯化 | 第45-50页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·用于蛋白纯化溶液的配制 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达 | 第45页 |
| ·目的蛋白存在情况检测 | 第45-46页 |
| ·镍柱的处理 | 第46页 |
| ·镍柱的再生 | 第46页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·纯化蛋白的浓缩 | 第47页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的制备及纯化 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白浓度的计算 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白存在形式检测 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第五章 重组IFN-γ蛋白多克隆抗体制备及其活性检测 | 第50-55页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·主要试剂及实验动物 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第50页 |
| ·重组蛋白活性检测 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·抗体制备结果 | 第51页 |
| ·重组蛋白活性检测结果 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第53页 |
| ·抗体检测方法 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白活性检测 | 第54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
| 硕士期间发的文章 | 第65页 |
