| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 TLR研究进展 | 第13-27页 |
| ·TLR的发现与种类 | 第13-14页 |
| ·TLR的表达与调控 | 第14-16页 |
| ·哺乳类和鱼类TLR | 第16-21页 |
| ·TLR的结构、接头分子及TLR信号传导通路 | 第21-26页 |
| ·TLR的免疫学功能 | 第26-27页 |
| 2 斜带石斑鱼分子免疫基础及其病原溶藻弧菌的研究进展 | 第27-31页 |
| ·斜带石斑鱼分子免疫研究进展 | 第28-30页 |
| ·溶藻弧菌的危害与致病机理 | 第30-31页 |
| 3 研究目的 | 第31-33页 |
| 第二章 EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88基因的克隆与序列分析 | 第33-75页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-43页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·菌株、载体和实验鱼 | 第35页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88全长cDNA的克隆 | 第35-42页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88序列生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-73页 |
| ·总RNA质量检测 | 第43页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88基因中间片段扩增结果 | 第43-44页 |
| ·3'RACE-PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| ·5'RACE-PCR扩增结果 | 第45-47页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88基因全长cDNA序列特征 | 第47-54页 |
| ·同源性分析 | 第54-59页 |
| ·进化分析 | 第59-62页 |
| ·信号肽预测 | 第62-63页 |
| ·蛋白功能预测 | 第63-66页 |
| ·蛋白结构域比较 | 第66-68页 |
| ·不同脊椎动物TLR1、TLR2和MyD88序列比较 | 第68-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 第三章 EcTLR1、EcTLR2和EcMyD88免疫应答分析 | 第75-96页 |
| 1 前言 | 第75-76页 |
| 2 材料与方法 | 第76-80页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·主要试剂与菌种 | 第76-77页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88和EcIL-1β qPCR检测方法的建立 | 第77-78页 |
| ·斜带石斑鱼的刺激处理与采样 | 第78-79页 |
| ·总RNA的提取 | 第79页 |
| ·RNA样品中DNA的处理 | 第79页 |
| ·cDNA合成 | 第79页 |
| ·qPCR | 第79-80页 |
| 3 结果 | 第80-93页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88、EcIL-1β和Ecβ-actin qPCR标准曲线的建立 | 第80-87页 |
| ·EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88在正常组织中的分布 | 第87-89页 |
| ·LPS作用后EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88和EcIL-1β表达变化 | 第89-90页 |
| ·PolyI:C作用后EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88和EcIL-1β表达变化 | 第90-91页 |
| ·溶藻弧菌刺激后EcTLR1、EcTLR2、EcMyD88和EcIL-1β表达变化 | 第91-93页 |
| 4. 讨论 | 第93-96页 |
| 第四章 EcMyD88基因的原核表达与纯化 | 第96-110页 |
| 1 前言 | 第96页 |
| 2 材料与方法 | 第96-103页 |
| ·仪器设备 | 第96页 |
| ·实验试剂 | 第96-97页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第97页 |
| ·EcMyD88基因的扩增与克隆 | 第97页 |
| ·EcMyD88 cDNA表达载体的构建 | 第97-99页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第99页 |
| ·样品的处理与SDS-PAGE电泳 | 第99-100页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第100-101页 |
| ·免疫印迹检测表达的蛋白 | 第101-103页 |
| 3 结果 | 第103-108页 |
| ·EcMyD88基因ORF的扩增与克隆 | 第103页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第103-104页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第104-105页 |
| ·重组蛋白的特异性与可溶性检测及纯化结果 | 第105-106页 |
| ·重组蛋白的Western blot分析 | 第106-108页 |
| 4 讨论 | 第108-110页 |
| 第五章 总结 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第124页 |
