| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 一 宫颈癌和HPV | 第12-17页 |
| 1. HPV的亚型 | 第13页 |
| 2. HPV的结构与功能 | 第13-15页 |
| 3. HPV疫苗的研究进展 | 第15-17页 |
| 二 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-24页 |
| 1. 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第17-18页 |
| 2. 与其他表达系统的比较 | 第18页 |
| 3. 巴斯德毕赤酵母的菌株和表达载体 | 第18-24页 |
| 第一章 HPV16PPIC9K-L1/E7_L2/E7疫苗的构建 | 第24-33页 |
| 一 材料仪器与试剂 | 第24-25页 |
| 1. 材料 | 第24-25页 |
| 2. 常用溶液及配置 | 第25页 |
| 二 实验方法 | 第25-30页 |
| 1. 引物设计 | 第25-26页 |
| 2. 基因扩增 | 第26-27页 |
| 3. 扩增产物的回收 | 第27页 |
| 4. pPIC9k-L1/E7和pPIC9k-L2/E7重组子的构建与质粒提取 | 第27-30页 |
| 5. 质粒的线性化 | 第30页 |
| 三 实验结果 | 第30-32页 |
| 1. 目的基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2. 重组质粒与酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 四 小结 | 第32-33页 |
| 第二章 HPV16-L1/E7_L2/E7疫苗在毕赤酵母中的诱导表达及纯化 | 第33-47页 |
| 一 材料试剂 | 第33-35页 |
| 1. 主要仪器 | 第33页 |
| 2. 主要试剂和溶液 | 第33-35页 |
| 二 操作方法 | 第35-42页 |
| 1. 毕赤酵母感受态的制备及电转化 | 第35-36页 |
| 2. 重组酵母GS115阳性转化子的高拷贝外源基因整合筛选及鉴定 | 第36-37页 |
| 3. 重组蛋白的诱导表达 | 第37-40页 |
| 4. 目的蛋白的规模化发酵 | 第40-41页 |
| 5. 表达产物的小量纯化 | 第41-42页 |
| 三 实验结果 | 第42-45页 |
| 1. PCR鉴定重组子 | 第42-43页 |
| 2. 表型筛选 | 第43页 |
| 3. SDS-PAGE和Western-blot电泳检测表达产物及表达量的检测 | 第43-44页 |
| 4. 甲醇浓度对HPV16型pPIC9k-L1/E7融合蛋白的诱导情况 | 第44页 |
| 5. PH值对HPV16型pPIC9k-L1/E7融合蛋白的表达影响 | 第44-45页 |
| 6. HPV16型pPIC9k-L1/E7融合蛋白最佳诱导时间的确定 | 第45页 |
| 四 小结 | 第45-47页 |
| 第三章 HPV16-L1/E7融合蛋白免疫原性和抗肿瘤的初步研究 | 第47-53页 |
| 一 材料试剂 | 第47页 |
| 1. 细胞株 | 第47页 |
| 2. 实验动物 | 第47页 |
| 3. 试剂和器材 | 第47页 |
| 二 实验方法 | 第47-49页 |
| 1. 动物的免疫 | 第47-48页 |
| 2. 抗血清检测 | 第48页 |
| 3. 淋巴细胞增殖实验 | 第48-49页 |
| 4. 抗肿瘤实验 | 第49页 |
| 5. 数据处理 | 第49页 |
| 三 实验结果 | 第49-52页 |
| 1. 抗血清的检测 | 第49-50页 |
| 2. 淋巴细胞的增殖情况 | 第50页 |
| 3. 抗肿瘤实验 | 第50-52页 |
| 四 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
