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利用抑制消减杂交(SSH)技术筛选乙烯利诱导黄瓜茎尖雌性表达相关基因

摘要第1-12页
Abstract第12-15页
1 引言第15-33页
   ·研究的目的和意义第15-16页
   ·主要研究内容和技术路线第16-18页
     ·主要研究内容第16-17页
     ·研究的技术路线第17-18页
   ·国内外研究进展第18-30页
     ·黄瓜性别分化研究进展第18-20页
     ·环境条件及外源生长物质对黄瓜雌花分化的影响第20-21页
     ·乙烯的信号转导途径及研究进展第21-24页
     ·乙烯对黄瓜雌性分化的影响第24-26页
     ·SSH(抑制消减杂交)文库构建的原理及特点第26-29页
     ·SSH(抑制消减杂交)技术在植物中的应用第29-30页
   ·存在的问题及思路第30-33页
2 材料与方法第33-56页
   ·乙烯利对黄瓜的雌性效应研究第33-34页
     ·田间调查第33页
     ·雌雄花芽的电镜观察第33-34页
   ·乙烯利诱导黄瓜茎尖的SSH文库构建第34-45页
     ·试验材料第34-35页
     ·试验方法第35-36页
     ·抑制消减杂交第36-41页
     ·PCR产物的纯化第41-42页
     ·PCR产物克隆第42页
     ·PCR筛选第42-43页
     ·斑点杂交筛选第43-45页
   ·文库筛选基因及乙烯信号转导基因的表达检测第45-47页
     ·试验材料第45页
     ·试验方法第45-47页
   ·黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因(CS-SAHH)的克隆及表达分析第47-51页
     ·试验材料第47页
     ·试验方法第47-51页
   ·黄瓜EIN3-Binding F-box protein gene 1(CS-EBF1)基因的克隆及表达分析第51-53页
     ·试验材料第51页
     ·试验方法第51-53页
   ·黄瓜酸性核糖体蛋白(CS-P0)基因的克隆及表达分析第53-56页
     ·试验材料第53页
     ·试验方法第53-56页
3 结果与分析第56-97页
   ·不同浓度乙烯利对黄瓜的雌性诱导效果第56-58页
     ·150 mg/L乙烯利对两叶一心期黄瓜的诱雌效果最好第56-57页
     ·乙烯利处理后抑制黄瓜雄蕊发育的扫描电镜观察第57-58页
   ·黄瓜茎尖SSH差减文库构建第58-70页
     ·总RNA的提取及mRNA的分离第58-59页
     ·ds cDNA的合成及合成效率检测第59页
     ·接头连接效率检测第59-60页
     ·两次PCR扩增结果第60页
     ·消减效率的PCR检测第60-61页
     ·SSH产物克隆及文库质量评价第61-62页
     ·菌液斑点杂交第62页
     ·ESTs获得与分析第62-70页
   ·文库筛选ESTs及乙烯信号转导相关基因的表达研究第70-75页
     ·6个ESTs在植株不同部位的表达分析第70-72页
     ·乙烯合成与信号转导相关基因的表达分析第72页
     ·11个ESTs在茎尖中的表达分析第72-74页
     ·11个ESTs在花芽中的表达分析第74-75页
   ·S-腺苷-L高半胱氨酸水解酶基因cDNA全长的克隆及表达分析第75-85页
     ·CS-SAHH基因编码区全长的获得第75-78页
     ·CS-SAHH蛋白结构分析第78-82页
     ·CS-SAHH基因的组织特异性表达分析第82-85页
   ·EIN3-Binding F-box protein 1基因cDNA全长的克隆及表达分析第85-92页
     ·CS-EBF1基因编码区全长片段的获得第85-87页
     ·CS-EBF1蛋白结构分析第87-90页
     ·乙烯利诱导后CS-EBF1基因的表达研究第90-92页
   ·酸性核糖体蛋白(CS-PO)基因的克隆及表达分析第92-97页
     ·CS-PO基因编码区全长片段的获得第92-93页
     ·CS-PO蛋白结构分析第93-95页
     ·CS-PO基因的组织特异性表达分析第95-97页
4 讨论第97-105页
   ·乙烯利对黄瓜雄性系的促雌效果第97页
   ·利用抑制消减杂交(SSH)技术筛选乙烯利诱导黄瓜雌性表达相关基因第97-98页
   ·黄瓜雌性表达相关基因的表达分析第98-99页
   ·黄瓜雌性表达相关基因第99-103页
     ·EIN3-Binding F-box protein 1基因(CS-EBF1)第99-101页
     ·S-腺苷-L高半胱氨酸水解酶基因(CS-SAHH)第101-102页
     ·酸性核糖体蛋白PO基因(CS-PO)第102-103页
   ·本研究的创新与不足第103-105页
     ·本研究的创新第103页
     ·本研究的不足第103-105页
5 结论第105-107页
致谢第107-109页
参考文献第109-119页
附录第119-125页
攻读博士期间发表的学术论文第125页

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