| 摘要 | 第1-11页 |
| SUMMARY | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1. 水稻矮缩病毒的研究进展 | 第13-23页 |
| ·水稻矮缩病毒的概述 | 第13-14页 |
| ·病毒粒体形态与结构组成 | 第14-21页 |
| ·病毒的粒体形态结构 | 第14-15页 |
| ·病毒的结构组成 | 第15-17页 |
| ·基因组结构组成和功能表达策略 | 第17-21页 |
| ·RDV 结构蛋白的研究 | 第17-19页 |
| ·RDV 非结构蛋白的研究 | 第19-21页 |
| ·水稻矮缩病毒的侵染、复制和组装 | 第21-22页 |
| ·RDV 与寄主互作的研究 | 第22-23页 |
| 2. 病毒与核仁 | 第23-32页 |
| ·核仁的结构与功能 | 第24-25页 |
| ·细胞核中其它结构与功能 | 第25-28页 |
| ·Cajal bodies | 第25-26页 |
| ·核小点(Nuclear speckles) | 第26-27页 |
| ·植物体内新的核结构域(Novel plant nuclear domains) | 第27-28页 |
| ·核仁中的主要蛋白 | 第28页 |
| ·核仁与细胞周期 | 第28-29页 |
| ·病毒与核仁的互作 | 第29-31页 |
| ·核仁定位信号(NoLS) | 第31-32页 |
| 3. 本研究的依据和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 水稻矮缩病毒侵染水稻后的转录谱分析 | 第34-59页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-41页 |
| ·试验材料 | 第34-37页 |
| ·水稻材料 | 第35页 |
| ·虫源和毒源 | 第35页 |
| ·水稻和烟草基因Real-time PCR引物 | 第35-37页 |
| ·试验方法 | 第37-41页 |
| ·试验材料准备 | 第37页 |
| ·基因芯片制备 | 第37-38页 |
| ·Real-Time PCR 实验 | 第38页 |
| ·生物信息学分析 | 第38-39页 |
| ·植物蛋白的Western blot检测 | 第39-40页 |
| ·电镜样品制备 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-55页 |
| ·RDV 侵染水稻后的转录谱分析 | 第41页 |
| ·Gene Ontology (GO) 细胞学定位分析 | 第41-42页 |
| ·RDV 侵染水稻后差异表达基因的功能分类 | 第42-46页 |
| ·蛋白质生物合成相关基因被诱导 | 第46页 |
| ·转座及反转座子蛋白/RNA 沉默相关基因被诱导 | 第46-47页 |
| ·RDV 的侵染调节了内源激素相关基因 | 第47页 |
| ·Real time-PCR 验证Microarray 数据 | 第47-50页 |
| ·RDV 的侵染水稻后的核仁形态观察 | 第50-51页 |
| ·RDV S11 能够调节核仁基因的表达 | 第51-55页 |
| ·分析与讨论 | 第55-59页 |
| 第三章 水稻矮缩病毒 Pns6、Pns10 和 Pns11 的亚细胞定位 | 第59-71页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料与方法 | 第59-63页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·质粒及菌株 | 第59-60页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·农杆菌电击转化 | 第60页 |
| ·烟草BY2 悬浮细胞的培养及原生质体的电击转化 | 第60-62页 |
| ·农杆菌渗透注射及在烟草表皮中瞬时表达外源基因 | 第62-63页 |
| ·激光共聚焦观察 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-68页 |
| ·Pns6、Pns10 和Pns11 亚细胞定位 | 第63-64页 |
| ·Pns6、Pns10和Pns11在BY-2细胞中的 | 第64-65页 |
| ·Pns6、Pns10 和Pns11 在烟草表皮细胞中的 | 第65-68页 |
| ·分析与讨论 | 第68-71页 |
| ·Pns6、Pns10 和Pns11 亚细胞定位于功能的 | 第68-69页 |
| ·RDV Pns11 的双定位形式 | 第69-71页 |
| 第四章 水稻矮缩病毒Pns11 的核仁定位及其与核仁蛋白的互作 | 第71-107页 |
| ·引言 | 第71-73页 |
| ·材料与方法 | 第73-81页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·质粒及菌株 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·酶与试剂 | 第73-74页 |
| ·PCR 引物 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-81页 |
| ·载体构建 | 第74-75页 |
| ·植物总RNA 的提取 | 第75-76页 |
| ·反转录PCR (RT-PCR) | 第76页 |
| ·病毒诱导基因沉默（VIGS）内源基因 | 第76-77页 |
| ·农杆菌渗透注射及瞬时表达外源基因 | 第77页 |
| ·激光共聚焦观察 | 第77页 |
| ·酵母双杂高效转化(LiAc 法) | 第77-78页 |
| ·酵母Y2HGold 感受态的制备 | 第77页 |
| ·重组质粒转化酵母 | 第77-78页 |
| ·mRNA 和siRNA 的Northern 检测 | 第78-81页 |
| ·m RNA 的Northern 杂交 | 第78-79页 |
| ·siRNA的Northern杂交 | 第79-81页 |
| ·试验结果 | 第81-104页 |
| ·OsFib 与其它物种的 Fibrillarin 之间的氨基酸序列的进化分析 | 第81-82页 |
| ·OsFibl 蛋白质三维结构预测 | 第82页 |
| ·OsFib 氨基酸序列与其它物种的 Fibrillarin 同源性分析 | 第82-87页 |
| ·OsFibl 在烟草表皮细胞中的亚细胞定位 | 第87-88页 |
| ·RDV Pns11与NbFibl 和OsFibl 共定位细胞核 | 第88-89页 |
| ·RDV Pns11 核定位信号突变体在烟草表皮细胞中的定位 | 第89-92页 |
| ·RDV Pns11 是一个核仁定位信号分子 | 第92-94页 |
| ·RDV Pns11 NLS 定位核仁的关键氨基酸 | 第94-97页 |
| ·RDV Pns11 与OsFib 的互作研究 | 第97-99页 |
| ·Fibrillarin基因的功能与Pns11的定位以及沉默抑制活性的关系 | 第99-104页 |
| ·病毒诱导基因沉默（VIGS）技术简介 | 第100页 |
| ·病毒诱导烟草中Fibrillarin基因沉默后的表型观察 | 第100-102页 |
| ·Fibrillarin 基因的沉默不会影响Pns11 的定位 | 第102-103页 |
| ·Fibrillarin 基因的沉默影响了Pns11的RNA沉默抑制活性 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-107页 |
| 第五章 水稻矮缩病毒 Pns11 与水稻瘤矮病毒 Pns12的功能比较 | 第107-122页 |
| ·引言 | 第107-108页 |
| ·材料和方法 | 第108-111页 |
| ·载体构建与农杆菌 | 第108-110页 |
| ·农杆菌浸润和 GFP 成像 | 第110页 |
| ·RNA 提取和Northern Blot | 第110页 |
| ·共聚焦显微镜观察 | 第110-111页 |
| ·结果与分析 | 第111-119页 |
| ·RDV Pns11 蛋白能够抑制ssGFP 诱发的局部RNA 沉默 | 第111-113页 |
| ·RGDV Pns12 蛋白能够抑制ssGFP诱发的局部RNA 沉默 | 第113-115页 |
| ·RGDV Pns12 蛋白不能抑制由dsGFP 诱发的局部沉默 | 第115-116页 |
| ·RGDV Pns12 能够抑制PVX 诱发的RNA 沉默 | 第116-119页 |
| ·讨论 | 第119-122页 |
| 第六章 总结与展望 | 第122-125页 |
| ·RDV 与水稻互作过程中核仁和核糖体相关基因被诱导 | 第122-123页 |
| ·RDV Pns11 是一个核仁定位蛋白并能诱导Fibrillarin 基因的表达 | 第123页 |
| ·RGDV Pns12与RDV Pns11具有功能和定位形式上的相 | 第123-124页 |
| ·研究展望 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-143页 |
| 附录 1: Functional classifications of RDV responsive genes | 第143-167页 |
| 附录 2: 本论文中所用术语缩写与中英文对照 | 第167-168页 |
| 附录 3:攻读博士期间文章的发表和投稿情况 | 第168-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
