| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| 1 nm23-H1/NDPK-A概况 | 第11-12页 |
| ·nm23-H1/NDPK-A起源 | 第11页 |
| ·nm23-H1/NDPK-A结构特征 | 第11-12页 |
| 2 nm23-H1/NDPK-A功能作用 | 第12-18页 |
| ·nm23-H1基因与其它基因的相互作用 | 第12-13页 |
| ·nm23-H1与肿瘤 | 第13-15页 |
| ·nm23-H1与细胞增殖和分化 | 第15页 |
| ·nm23-H1的激酶活性 | 第15-16页 |
| ·NDPK-A的其它生物学活性 | 第16-17页 |
| ·NDPK-A的氧化还原异构与活性关系 | 第17-18页 |
| 3 NDPK-A的应用研究 | 第18-20页 |
| ·抗病毒药物增敏剂 | 第19页 |
| ·肿瘤标志物 | 第19页 |
| ·药靶研究 | 第19-20页 |
| ·化疗药物增敏剂 | 第20页 |
| 4 流式细胞仪检测细胞凋亡的原理 | 第20-21页 |
| 5 真核载体pEGFP-C1简介 | 第21-22页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 7 本研究的创新点 | 第23页 |
| 8 技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第25-46页 |
| 一、实验材料 | 第25-27页 |
| 1 菌种、细胞与质粒 | 第25页 |
| 2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3 引物 | 第26页 |
| 4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-46页 |
| 1 构建nm23-H1基因及突变型真核重组载体 | 第27-32页 |
| ·实验流程图 | 第27-28页 |
| ·PCR引物的稀释 | 第28页 |
| ·质粒抽提 | 第28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·pEGFP-C1空载体的质粒抽提 | 第29页 |
| ·空载体与目的基因的酶切反应 | 第29-30页 |
| ·空载体与目的基因的连接反应 | 第30页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化感受态DH5α | 第31页 |
| ·重组载体鉴定 | 第31-32页 |
| 2 重组载体的中量抽提 | 第32-33页 |
| 3 NDPK-A及其突变体的表达鉴定 | 第33-37页 |
| ·293细胞转染效率的摸索 | 第33页 |
| ·NDPK-A及其突变体的表达 | 第33-34页 |
| ·蛋白含量测定(Bradford法) | 第34页 |
| ·Western blot鉴定NDPK-A及其突变体 | 第34-37页 |
| 4 融合蛋白的胞内定位 | 第37页 |
| 5 Vero细胞稳定细胞株的构建 | 第37-39页 |
| ·Vero细胞转染条件的摸索 | 第37-38页 |
| ·抗生素作用的最佳浓度确定 | 第38页 |
| ·Vero细胞的稳定筛选 | 第38-39页 |
| 6 NDPK-A及其突变体的抗病毒增敏功能研究 | 第39-40页 |
| ·阿昔洛韦的细胞毒性检测 | 第39页 |
| ·阿昔洛韦的抗病毒药效实验 | 第39页 |
| ·MTT法检测 | 第39-40页 |
| ·病毒空斑法检测 | 第40页 |
| 7 NDPK-A及其突变体对A549凋亡的研究 | 第40-41页 |
| ·流式细胞术 | 第40-41页 |
| 8 nm23-H1及突变基因与pcDNA3.1(-)、pDsRed-C1的重组构建 | 第41-46页 |
| ·pcDNA3.1(-)、pDsRed-C1质粒抽提 | 第41页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·空载体与目的基因的酶切反应 | 第42页 |
| ·空载体与目的基因的连接反应 | 第42-43页 |
| ·连接产物转化感受态DH5α | 第43页 |
| ·重组载体鉴定 | 第43-46页 |
| 第三章 实验结果 | 第46-63页 |
| 1 nm23-H1及其突变基因真核表达载体的构建 | 第46-50页 |
| ·nm23-H1及其突变基因PCR扩增 | 第46页 |
| ·nm23-H1及其突变基因PCR扩增后回收 | 第46-47页 |
| ·pEGFP-C1空载体,nm23-H1及其突变基因双酶切回收 | 第47页 |
| ·重组载体鉴定结果 | 第47-50页 |
| 2 中量抽提的重组载体浓度与纯度 | 第50-51页 |
| 3 NDPK-A及其突变体的表达 | 第51-52页 |
| ·293细胞的转染效率效果 | 第51页 |
| ·Western blot鉴定结果 | 第51-52页 |
| 4 NDPK-A野生型及突变体在真核细胞内的荧光定位 | 第52-54页 |
| 5 Vero稳定细胞株筛选结果 | 第54-56页 |
| ·Vero细胞的转染效果 | 第54-55页 |
| ·抗生素G418对Vero细胞的作用结果 | 第55-56页 |
| ·Vero稳定细胞株的成功构建 | 第56页 |
| 6 NDPK-A及其突变体的抗病毒增敏功能 | 第56-60页 |
| ·阿昔洛韦的细胞毒性结果 | 第56页 |
| ·阿昔洛韦的抗病毒药效结果 | 第56-57页 |
| ·MTT法测定结果 | 第57-58页 |
| ·病毒空斑实验结果 | 第58-60页 |
| 7 NDPK-A及其突变体对A549凋亡的影响 | 第60-63页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第63-68页 |
| 1 讨论 | 第63-67页 |
| ·nm23-H1突变型基因的构建 | 第63-64页 |
| ·NDPK-A及其突变体在真核细胞内的表达鉴定 | 第64页 |
| ·NDPK-A及其突变体在胞浆内的定位 | 第64-65页 |
| ·NDPK-A及其突变体的抗病毒增敏活性 | 第65-66页 |
| ·NDPK-A及其突变体诱导A549凋亡活性 | 第66-67页 |
| 2 结论 | 第67页 |
| 3 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 经费资助 | 第82页 |
| 硕士期间发表论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 发表论文 | 第84-90页 |
