Armillariella tabescens EJLY2098 MAN47 β-甘露聚糖酶体外分子定向进化和结构分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 前言 | 第8-25页 |
| ·β-甘露聚糖酶的简介 | 第8-16页 |
| ·定向进化的起源与发展 | 第16-18页 |
| ·酶定向进化的策略 | 第18-22页 |
| ·酶定向进化的筛选 | 第22-23页 |
| ·研究的背景,目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 实验设备、试剂及材料 | 第25-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-32页 |
| 第三章 实验方法 | 第32-50页 |
| ·易错PCR(EP-PCR)突变文库构建 | 第32-37页 |
| ·EP-PCR突变文库的筛选 | 第37-41页 |
| ·DNA shuffling文库的构建 | 第41-45页 |
| ·DNA shuffling库的筛选 | 第45-46页 |
| ·试管扩大培养挑选耐酸高温稳定克隆 | 第46页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶突变体的诱导表达 | 第46页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶突变体酶学性质分析 | 第48-49页 |
| ·突变体测序与分析 | 第49-50页 |
| 第四章 实验结果 | 第50-74页 |
| ·易错PCR突变库的建立 | 第50-52页 |
| ·EP-PCR库的筛选 | 第52-54页 |
| ·DNA Shuffling库的建立 | 第54-60页 |
| ·DNA Shuffling库的筛选 | 第60-61页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶的诱导表达 | 第61页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶的纯化 | 第61-64页 |
| ·耐酸高温稳定甘露聚糖酶酶学性质分析 | 第64-66页 |
| ·突变体结构分析 | 第66-74页 |
| 第五章 讨论 | 第74-80页 |
| ·定向进化宿主菌的选择 | 第74页 |
| ·EP-PCR库的构建 | 第74-75页 |
| ·DNA Shuffling库的构建 | 第75页 |
| ·突变库的库容 | 第75页 |
| ·突变文库的筛选 | 第75-76页 |
| ·酶的诱导表达与纯化 | 第76页 |
| ·耐酸高温稳定突变酶的酶学性质分析 | 第76-77页 |
| ·耐酸高温稳定酶稳定性机制探讨 | 第77-80页 |
| 总结与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及获奖情况 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
