| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 综述前言 | 第12页 |
| 2 MHCⅠ类分子结构与作用机理 | 第12-17页 |
| ·MHCⅠ类分子的结构与分布 | 第12-15页 |
| ·重链(α chain) | 第12-15页 |
| ·肽结合区(peptide-binding domain,PBD) | 第13-14页 |
| ·免疫球蛋白样区(immunoglobulin-like region) | 第14页 |
| ·跨膜区(transmembrane region) | 第14页 |
| ·胞浆区(cytoplasmic region) | 第14-15页 |
| ·轻链(β2-microglobulin) | 第15页 |
| ·MHCⅠ类分子作用机理的研究 | 第15-17页 |
| ·MHCⅠ类分子介导的抗原递呈 | 第15-16页 |
| ·约束免疫细胞间的相互作用 | 第16页 |
| ·参与对免疫应答的遗传控制 | 第16页 |
| ·引起移植排斥反应 | 第16-17页 |
| ·参与 T 细胞分化过程 | 第17页 |
| ·其他作用 | 第17页 |
| 3 MHCⅠ类分子与多肽的结合 | 第17-19页 |
| ·MHCⅠ类分子与多肽结合的鉴定 | 第17-18页 |
| ·能与MHCⅠ类分子结合多肽的特征 | 第18-19页 |
| 4 T 细胞抗原表位分析与流感病毒抗原表位的研究 | 第19-22页 |
| ·T细胞抗原表位的分析方法 | 第19-20页 |
| ·流感病毒抗原表位的研究进展 | 第20-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 试验一 鸳鸯鸭 MHC Ⅰ α链、β2 m 链基因的克隆与序列分析 | 第23-33页 |
| 1 材料和方法 | 第23-25页 |
| ·供试材料 | 第23页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·菌种和质粒 | 第23页 |
| ·基因克隆相关试剂 | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第23-24页 |
| ·鸳鸯鸭脾脏组织总 RNA 的提取 | 第24页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链和 β2m 链基因 RT-PCR 扩增 | 第24页 |
| ·反转录(RT) | 第24页 |
| ·PCR 扩增 | 第24页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第24页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·挑斑 | 第25页 |
| ·质粒提取 | 第25页 |
| ·克隆的 PCR 和酶切鉴定 | 第25页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链、β2 m 链基因的测序与序列分析 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-31页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链和 β2m 链基因 RT-PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·鸳鸯鸭MHCⅠα链和β2m 链基因的克隆与鉴定 | 第26-27页 |
| ·鸳鸯鸭MHCⅠα链和β2m 链序列测定及分析 | 第27-31页 |
| ·鸳鸯鸭MHCⅠα链基因序列的测定及分析 | 第27-29页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链与其他鸭及不同动物的 MHCⅠα 链胞外区成熟肽基因氨基酸序列同源性比较及系统进化分析 | 第29-30页 |
| ·鸳鸯鸭β2m链基因序列的测定及分析 | 第30页 |
| ·鸳鸯鸭 β2m 链与其他鸭及不同动物的 MHCⅠβ2m 链成熟肽氨基酸序列同源性比较及系统进化分析 | 第30-31页 |
| 3 结论与讨论 | 第31-33页 |
| ·关于脾脏组织RNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·关于鸭 MHCⅠα 链和 β2m 链基因的序列分析 | 第32-33页 |
| 试验二 鸳鸯鸭MHC Ⅰ α链胞外区和β2m链成熟肽在大肠杆菌中的表达 | 第33-47页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·供试材料 | 第33页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-37页 |
| ·目的片段的制备 | 第33-34页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽基因的 PCR 扩增与纯化回收 | 第34页 |
| ·鸳鸯鸭MHCⅠα链胞外区成熟肽基因的酶切回收 | 第34页 |
| ·鸳鸯鸭β2m 链成熟肽基因的酶切回收 | 第34页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·表达载体的纯化与扩增 | 第34页 |
| ·表达载体的质粒提取 | 第34页 |
| ·表达质粒的酶切回收 | 第34-35页 |
| ·目的基因与表达质粒的连接 | 第35页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的序列测定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第36页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第36页 |
| ·包涵体的提取与纯化 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-45页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠa 链胞外区和 β2m 链成熟蛋白基因的扩增 | 第37页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)/Duck-MHCⅠ的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达载体pET-28a(+)/Duck-β2m 的鉴定 | 第39-40页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-MHCⅠ表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第40-43页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-MHC- I在E.coli中的表达 | 第40页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-MHCⅠ在E.coli中表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·融合蛋白pET-28a(+)/Duck-MHCⅠ的包涵体纯化 | 第42-43页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-β2m 表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第43-45页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-β2m在E.coli中的表达 | 第43页 |
| ·pET-28a(+)/Duck-β2m在E.coli中表达条件的优化 | 第43-45页 |
| ·融合蛋白pET-28a(+)/Duck-β2m的包涵体纯化 | 第45页 |
| 3 结论与讨论 | 第45-47页 |
| ·关于原核表达载体的选择 | 第45页 |
| ·关于表达条件的优化 | 第45-46页 |
| ·关于表达蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 试验三 鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 成熟肽分子结构与功能分析 | 第47-59页 |
| 1 材料与方法 | 第47-48页 |
| ·试验序列 | 第47页 |
| ·蛋白结构分析 | 第47页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽一级结构分析 | 第47页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽二级结构和功能分析 | 第47页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽三级结构分析 | 第47页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链与 HLA 成熟肽进化关系分析 | 第47-48页 |
| 2 结果 | 第48-57页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα、β2m 胞外区成熟肽蛋白一级结构分析 | 第48-49页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区成熟肽蛋白二级结构和功能分析 | 第49-53页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽质的理化特性分析 | 第49-50页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽质的磷酸化位点分析 | 第50-51页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽质的蛋白质超家族分析 | 第51-52页 |
| ·鸳鸯鸭 MHCⅠα 链胞外区和 β2m 链成熟肽特殊局部结构 | 第52-53页 |
| ·鸳鸯鸭 MHC I、β2m 成熟肽蛋白三级结构和功能分析 | 第53-55页 |
| ·鸳鸯鸭与不同单倍型的人 MHCⅠα 链胞外区成熟肽氨基酸的进化关系 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| ·蛋白二级结构的分析 | 第57页 |
| ·蛋白三级结构的分析 | 第57-58页 |
| ·鸳鸯鸭与不同单倍型HLA 进化关系分析 | 第58-59页 |
| 试验四 鸳鸯鸭 MHCⅠ限制的禽流感病毒 T 细胞表位筛选 | 第59-69页 |
| 1 材料与方法 | 第59-60页 |
| ·禽流感NP 抗原 | 第59页 |
| ·NP 抗原的一般特征 | 第59页 |
| ·CTL 表位分析方案 | 第59-60页 |
| ·超基序方案 | 第59页 |
| ·量化基序方案 | 第59-60页 |
| ·蛋白酶切位点分析 | 第60页 |
| ·TAP 分析 | 第60页 |
| 2 结果 | 第60-67页 |
| ·NP 抗原的一般特征 | 第60-61页 |
| ·SYFPEITHI 分析结果 | 第61页 |
| ·BIMAS 分析结果 | 第61-62页 |
| ·蛋白酶切位点分析结果 | 第62-66页 |
| ·TAP 分析结果 | 第66-67页 |
| ·综合筛选结果 | 第67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| ·表位分析中 NP 蛋白的选择 | 第67页 |
| ·关于 CTL 细胞表位的分析 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 英文摘要 | 第78-79页 |
