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红平红球菌rpf基因突变、生物活性及应用研究

摘要第9-11页
Abstract第11-12页
第1章 绪论第13-20页
    1.1 细菌活的非可培养(VBNC)状态研究状况第13-16页
        1.1.1 VBNC状态细菌及其形成第13-14页
        1.1.2 VBNC状态细菌的生物学特性第14-15页
        1.1.3 VBNC状态细菌的检测和复苏第15-16页
    1.2 复苏促进因子(Rpf)的研究进展第16-18页
        1.2.1 Rpf的发现第16页
        1.2.2 Rpf家族基因特性第16-17页
        1.2.3 Rpf的广泛应用第17-18页
    1.3 石油污染土壤修复研究第18-19页
        1.3.1 石油污染土壤治理办法第18页
        1.3.2 石油降解微生物第18-19页
    1.4 本课题的研究目的意义第19-20页
第2章 红平红球菌Rpf原核表达及性质研究第20-33页
    2.1 材料与方法第20-27页
        2.1.1 菌株与质粒第20页
        2.1.2 培养基、试剂及仪器第20-22页
        2.1.3 红平红球菌rpf基因在大肠杆菌中表达及纯化第22-23页
        2.1.4 重组Rpf蛋白的SDS-PAGE分析第23页
        2.1.5 Western-Blotting检验重组Rpf蛋白第23页
        2.1.6 蛋白质浓度测定第23-24页
        2.1.7 重组Rpf蛋白溶菌酶活性测定第24-26页
        2.1.8 金属离子和蛋白酶抑制剂对Rpf溶菌酶活性影响第26页
        2.1.9 重组Rpf的蛋白酶活性测定第26页
        2.1.10 重组Rpf对牛血清白蛋白水解活性第26-27页
        2.1.11 Rpf蛋白对正常培养的红平红球菌的促生长作用第27页
        2.1.12 Rpf蛋白对VBNC状态的红平红球菌的复苏作用第27页
    2.2 结果与分析第27-32页
        2.2.1 红平红球菌KB1 重组Rpf蛋白的纯化及SDS-PAGE鉴定第27-28页
        2.2.2 重组Rpf蛋白的Western-Blotting鉴定第28页
        2.2.3 重组Rpf蛋白的酶活性第28-29页
        2.2.4 不同金属离子和抑制剂对Rpf酶活性的影响第29-30页
        2.2.5 重组Rpf蛋白对牛血清白蛋白水解作用第30页
        2.2.6 重组Rpf蛋白对红平红球菌KB1 的促生长作用第30-31页
        2.2.7 重组Rpf蛋白对VBNC状态的红平红球菌KB1 的复苏作用第31-32页
    2.3 讨论与结果第32-33页
第3章 Rpf基因定点突变体构建、表达及性质研究第33-45页
    3.1 材料与方法第33-37页
        3.1.1 菌株及质粒第33-34页
        3.1.2 主要试剂与仪器第34页
        3.1.3 Rpf基因突变位点的选择及突变点序列第34-35页
        3.1.4 突变体表达质粒的酶切与序列鉴定第35页
        3.1.5 感受态细胞的制备第35页
        3.1.6 重组质粒的转化与抽提第35-36页
        3.1.7 Rpf突变蛋白表达与纯化第36页
        3.1.8 纯化的Rpf突变蛋白浓度测定第36页
        3.1.9 纯化的Rpf突变蛋白溶菌酶活性测定第36页
        3.1.10 纯化的Rpf突变蛋白溶蛋白酶活性测定第36页
        3.1.11 Rpf突变体蛋白对正常状态红平红球菌生长促进作用第36页
        3.1.12 Rpf突变体蛋白对VBNC状态的红平红球菌的复苏作用第36-37页
    3.2 结果与分析第37-43页
        3.2.1 Rpf突变蛋白表达及纯化第37页
        3.2.2 纯化的Rpf突变体蛋白的浓度第37-38页
        3.2.3 纯化的Rpf突变体蛋白溶菌酶、蛋白酶活性第38页
        3.2.4 Rpf突变体蛋白酰胺酶、酯酶活性第38-40页
        3.2.5 Rpf突变蛋白对红平红球菌KB1 的促生长作用第40-41页
        3.2.6 Rpf突变蛋白对VBNC状态的红平红球菌KB1 的复苏第41-43页
    3.3 讨论与结果第43-45页
第4章 Rpf促进高效石油降解菌的分离及生长第45-55页
    4.1 材料与方法第45-48页
        4.1.1 菌株与培养基第45-46页
        4.1.2 主要试剂及仪器第46页
        4.1.3 添加Rpf对石油污染土壤微生物分离效果第46页
        4.1.4 石油降解效果测定第46-47页
        4.1.5 石油降解菌16S rDNA分析第47页
        4.1.6 重组Rpf蛋白对高效石油降解菌的促生长作用第47-48页
    4.2 结果与分析第48-53页
        4.2.1 重组Rpf蛋白对石油污染土壤可培养细菌数量的影响第48页
        4.2.2 分离石油降解菌鉴定与分析第48-50页
        4.2.3 降解菌石油降解率测定第50-51页
        4.2.4 重组Rpf蛋白对高效石油降解菌的促生长作用第51-53页
    4.3 讨论与结果第53-55页
结论第55-56页
参考文献第56-64页
致谢第64-65页
附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录第65页

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