| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 细菌活的非可培养(VBNC)状态研究状况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 VBNC状态细菌及其形成 | 第13-14页 |
| 1.1.2 VBNC状态细菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 VBNC状态细菌的检测和复苏 | 第15-16页 |
| 1.2 复苏促进因子(Rpf)的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 Rpf的发现 | 第16页 |
| 1.2.2 Rpf家族基因特性 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Rpf的广泛应用 | 第17-18页 |
| 1.3 石油污染土壤修复研究 | 第18-19页 |
| 1.3.1 石油污染土壤治理办法 | 第18页 |
| 1.3.2 石油降解微生物 | 第18-19页 |
| 1.4 本课题的研究目的意义 | 第19-20页 |
| 第2章 红平红球菌Rpf原核表达及性质研究 | 第20-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基、试剂及仪器 | 第20-22页 |
| 2.1.3 红平红球菌rpf基因在大肠杆菌中表达及纯化 | 第22-23页 |
| 2.1.4 重组Rpf蛋白的SDS-PAGE分析 | 第23页 |
| 2.1.5 Western-Blotting检验重组Rpf蛋白 | 第23页 |
| 2.1.6 蛋白质浓度测定 | 第23-24页 |
| 2.1.7 重组Rpf蛋白溶菌酶活性测定 | 第24-26页 |
| 2.1.8 金属离子和蛋白酶抑制剂对Rpf溶菌酶活性影响 | 第26页 |
| 2.1.9 重组Rpf的蛋白酶活性测定 | 第26页 |
| 2.1.10 重组Rpf对牛血清白蛋白水解活性 | 第26-27页 |
| 2.1.11 Rpf蛋白对正常培养的红平红球菌的促生长作用 | 第27页 |
| 2.1.12 Rpf蛋白对VBNC状态的红平红球菌的复苏作用 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.2.1 红平红球菌KB1 重组Rpf蛋白的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.2 重组Rpf蛋白的Western-Blotting鉴定 | 第28页 |
| 2.2.3 重组Rpf蛋白的酶活性 | 第28-29页 |
| 2.2.4 不同金属离子和抑制剂对Rpf酶活性的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重组Rpf蛋白对牛血清白蛋白水解作用 | 第30页 |
| 2.2.6 重组Rpf蛋白对红平红球菌KB1 的促生长作用 | 第30-31页 |
| 2.2.7 重组Rpf蛋白对VBNC状态的红平红球菌KB1 的复苏作用 | 第31-32页 |
| 2.3 讨论与结果 | 第32-33页 |
| 第3章 Rpf基因定点突变体构建、表达及性质研究 | 第33-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第33-34页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第34页 |
| 3.1.3 Rpf基因突变位点的选择及突变点序列 | 第34-35页 |
| 3.1.4 突变体表达质粒的酶切与序列鉴定 | 第35页 |
| 3.1.5 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 3.1.6 重组质粒的转化与抽提 | 第35-36页 |
| 3.1.7 Rpf突变蛋白表达与纯化 | 第36页 |
| 3.1.8 纯化的Rpf突变蛋白浓度测定 | 第36页 |
| 3.1.9 纯化的Rpf突变蛋白溶菌酶活性测定 | 第36页 |
| 3.1.10 纯化的Rpf突变蛋白溶蛋白酶活性测定 | 第36页 |
| 3.1.11 Rpf突变体蛋白对正常状态红平红球菌生长促进作用 | 第36页 |
| 3.1.12 Rpf突变体蛋白对VBNC状态的红平红球菌的复苏作用 | 第36-37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.2.1 Rpf突变蛋白表达及纯化 | 第37页 |
| 3.2.2 纯化的Rpf突变体蛋白的浓度 | 第37-38页 |
| 3.2.3 纯化的Rpf突变体蛋白溶菌酶、蛋白酶活性 | 第38页 |
| 3.2.4 Rpf突变体蛋白酰胺酶、酯酶活性 | 第38-40页 |
| 3.2.5 Rpf突变蛋白对红平红球菌KB1 的促生长作用 | 第40-41页 |
| 3.2.6 Rpf突变蛋白对VBNC状态的红平红球菌KB1 的复苏 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论与结果 | 第43-45页 |
| 第4章 Rpf促进高效石油降解菌的分离及生长 | 第45-55页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 菌株与培养基 | 第45-46页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第46页 |
| 4.1.3 添加Rpf对石油污染土壤微生物分离效果 | 第46页 |
| 4.1.4 石油降解效果测定 | 第46-47页 |
| 4.1.5 石油降解菌16S rDNA分析 | 第47页 |
| 4.1.6 重组Rpf蛋白对高效石油降解菌的促生长作用 | 第47-48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-53页 |
| 4.2.1 重组Rpf蛋白对石油污染土壤可培养细菌数量的影响 | 第48页 |
| 4.2.2 分离石油降解菌鉴定与分析 | 第48-50页 |
| 4.2.3 降解菌石油降解率测定 | 第50-51页 |
| 4.2.4 重组Rpf蛋白对高效石油降解菌的促生长作用 | 第51-53页 |
| 4.3 讨论与结果 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第65页 |
