| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-29页 |
| 1.1 木聚糖 | 第13-14页 |
| 1.1.1 木聚糖的来源 | 第13页 |
| 1.1.2 木聚糖的结构 | 第13-14页 |
| 1.2 木聚糖酶 | 第14-20页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的来源 | 第14页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的种类及其作用方式 | 第14-16页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的分子结构区域 | 第16-18页 |
| 1.2.4 木聚糖酶的催化机制 | 第18-20页 |
| 1.2.5 木聚糖酶的酶学性质 | 第20页 |
| 1.3 耐热木聚糖酶研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 耐热木聚糖酶的来源 | 第20-21页 |
| 1.3.2 木聚糖酶的嗜热机制 | 第21-23页 |
| 1.4 木聚糖酶热稳定性的分子改造 | 第23-25页 |
| 1.4.1 酶分子定向进化技术 | 第23-24页 |
| 1.4.2 酶分子理性设计 | 第24页 |
| 1.4.3 酶分子半理性设计 | 第24-25页 |
| 1.5 木聚糖酶的应用 | 第25-27页 |
| 1.5.1 木聚糖酶在食品行业的应用 | 第25页 |
| 1.5.2 木聚糖酶在饲料行业的应用 | 第25-26页 |
| 1.5.3 木聚糖酶在纸浆漂白行业的应用 | 第26-27页 |
| 1.5.4 木聚糖酶在其他领域的应用 | 第27页 |
| 1.6 本课题的研究内容与意义 | 第27-29页 |
| 1.6.1 本课题的主要研究内容 | 第27-28页 |
| 1.6.2 本课题的研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 那不勒斯热袍菌木聚糖酶B的克隆及表达 | 第29-42页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第29页 |
| 2.2.2 实验所用培养基和溶液 | 第29-31页 |
| 2.2.3 实验所用的分子试剂和酶 | 第31-32页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 2.2.5 引物的设计和合成 | 第33-34页 |
| 2.2.6 木聚糖酶基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.2.8 PCR产物回收 | 第35页 |
| 2.2.9 DNA连接 | 第35-36页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.2.11 转化 | 第36-37页 |
| 2.2.12 重组质粒pHsh-xlnB的构建 | 第37页 |
| 2.2.13 重组木聚糖酶Tne-xlnB的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-41页 |
| 2.3.1 木聚糖酶基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.3.2 重组质粒pHsh-xlnB的构建 | 第40页 |
| 2.3.3 木聚糖酶Tne-xlnB在大肠杆菌E.coliJM109中的表达 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 那不勒斯热袍菌木聚糖酶B的分离纯化及酶学活性的研究 | 第42-58页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-50页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第42页 |
| 3.2.2 实验所用培养基和溶液 | 第42-43页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.4 大肠杆菌化学感受态细胞的制备及质粒转化 | 第43-44页 |
| 3.2.5 木聚糖酶Tne-xlnB的纯化 | 第44-46页 |
| 3.2.6 酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 SDS-PAGE分析 | 第47页 |
| 3.2.8 木聚糖酶Tne-xlnB的蛋白浓度的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.9 木聚糖酶Tne-xlnB的酶学性质分析 | 第48-50页 |
| 3.2.10 木聚糖酶Tne-xlnB的N端测序 | 第50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-57页 |
| 3.3.1 木聚糖酶Tne-xlnB的镍亲和层析纯化结果分析 | 第50页 |
| 3.3.2 木聚糖酶Tne-xlnB蛋白理化性质分析 | 第50-53页 |
| 3.3.3 木聚糖酶Tne-xlnB的酶学性质 | 第53-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 那不勒斯热袍菌木聚糖酶Tne-xlnB的嗜热性研究 | 第58-77页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 质粒 | 第58页 |
| 4.2.2 培养基 | 第58页 |
| 4.2.3 分子试剂和溶液配制 | 第58页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-66页 |
| 4.3.1 Tne-xlnB与Tma-xlnB的同源性分析及蛋白结构模拟 | 第59页 |
| 4.3.2 突变位点的确定 | 第59-61页 |
| 4.3.3 引物设计 | 第61-62页 |
| 4.3.4 大肠杆菌E.coliJM109化学转化感受态细胞的制备 | 第62页 |
| 4.3.5 Tne-xlnB五个突变体的表达载体构建 | 第62-65页 |
| 4.3.6 Tne-xlnB突变体的诱导表达 | 第65页 |
| 4.3.7 Tne-xlnB突变体的纯化 | 第65页 |
| 4.3.8 Tne-xlnB突变体SDS-PAGE分析 | 第65页 |
| 4.3.9 Tne-xlnB突变体的蛋白浓度测定 | 第65页 |
| 4.3.10 酶活测定 | 第65页 |
| 4.3.11 Tne-xlnB突变体的酶学性质测定 | 第65-66页 |
| 4.4 结果与分析 | 第66-74页 |
| 4.4.1 Tne-xlnB与Tma-xlnB的同源性分析对及蛋白结构模拟 | 第66-67页 |
| 4.4.2 Tne-xlnB突变体在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第67-68页 |
| 4.4.3 Tne-xlnB突变体的酶学性质分析 | 第68-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-77页 |
| 第五章 总结及展望 | 第77-80页 |
| 5.1 总结 | 第77-78页 |
| 5.2 创新点 | 第78页 |
| 5.3 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第93页 |
