| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第23-26页 |
| 1 绪论 | 第26-53页 |
| 1.1 雌激素受体ERα和乳腺癌 | 第27-44页 |
| 1.1.1 ERα和ERβ | 第27-29页 |
| 1.1.2 ERa和雌激素信号通路 | 第29-30页 |
| 1.1.3 ERa辅调节因子 | 第30-36页 |
| 1.1.4 ERa翻译后修饰 | 第36-42页 |
| 1.1.5 乳腺癌分型和内分泌治疗 | 第42-44页 |
| 1.2 FOX蛋白家族和CHES1 | 第44-51页 |
| 1.2.1 FOX蛋白家族 | 第44-49页 |
| 1.2.2 CHES1简述 | 第49-51页 |
| 1.3 立题依据和研究思路 | 第51-53页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第51页 |
| 1.3.2 研究思路 | 第51-53页 |
| 2 CHES 1同ERa之间相互作用的研究 | 第53-73页 |
| 2.1 引言 | 第53页 |
| 2.2 仪器与材料 | 第53-56页 |
| 2.2.1 仪器 | 第53-54页 |
| 2.2.2 试剂 | 第54-56页 |
| 2.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第56页 |
| 2.3 实验方法 | 第56-68页 |
| 2.3.1 溶液配制 | 第56-58页 |
| 2.3.2 质粒构建 | 第58-60页 |
| 2.3.3 质粒和连接产物的转化 | 第60页 |
| 2.3.4 质粒提取和鉴定 | 第60页 |
| 2.3.5 感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| 2.3.6 细胞培养 | 第61页 |
| 2.3.7 细胞转染 | 第61-62页 |
| 2.3.8 细胞筛选 | 第62页 |
| 2.3.9 细胞裂解 | 第62页 |
| 2.3.10 SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳 | 第62-63页 |
| 2.3.11 蛋白免疫印迹 | 第63-64页 |
| 2.3.12 免疫荧光 | 第64-65页 |
| 2.3.13 免疫共沉淀 | 第65-66页 |
| 2.3.14 GST-pulldown | 第66-68页 |
| 2.4 实验结果 | 第68-72页 |
| 2.4.1 内源的CHES1和ERa之间存在相互作用 | 第68-69页 |
| 2.4.2 外源的CHES1同ERa之间的相互作用 | 第69-70页 |
| 2.4.3 CHES1和ERa相互作用区域的确定 | 第70-72页 |
| 2.5 讨论 | 第72页 |
| 2.6 小结 | 第72-73页 |
| 3 CHES1对ERa转录活性的影响 | 第73-85页 |
| 3.1 引言 | 第73页 |
| 3.2 仪器与材料 | 第73-74页 |
| 3.2.1 仪器 | 第73页 |
| 3.2.2 试剂 | 第73页 |
| 3.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第73-74页 |
| 3.3 实验方法 | 第74-79页 |
| 3.3.1 溶液配制 | 第74页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第74页 |
| 3.3.3 shCHES1质粒的构建 | 第74-76页 |
| 3.3.4 shCHES1质粒的转化 | 第76页 |
| 3.3.5 质粒转染 | 第76页 |
| 3.3.6 荧光素酶报告基因实验 | 第76页 |
| 3.3.7 逆转录PCR | 第76-78页 |
| 3.3.8 半定量PCR | 第78-79页 |
| 3.3.9 细胞裂解 | 第79页 |
| 3.3.10 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第79页 |
| 3.3.11 蛋白免疫印迹 | 第79页 |
| 3.3.12 统计学分析 | 第79页 |
| 3.4 实验结果 | 第79-83页 |
| 3.4.1 CHES1对ERα转录活性的影响 | 第79-82页 |
| 3.4.2 CHES1对ERα下游靶基因表达的影响 | 第82-83页 |
| 3.5 讨论 | 第83-84页 |
| 3.6 小结 | 第84-85页 |
| 4 CHES1抑制ERα转录活性的分子机制 | 第85-106页 |
| 4.1 引言 | 第85-86页 |
| 4.2 仪器与材料 | 第86页 |
| 4.2.1 仪器 | 第86页 |
| 4.2.2 试剂 | 第86页 |
| 4.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-91页 |
| 4.3.1 溶液配制 | 第86-87页 |
| 4.3.2 细胞培养 | 第87页 |
| 4.3.3 细胞转染 | 第87页 |
| 4.3.4 细胞裂解 | 第87页 |
| 4.3.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第87页 |
| 4.3.6 蛋白免疫印迹 | 第87页 |
| 4.3.7 免疫共沉淀 | 第87页 |
| 4.3.8 荧光素酶报告基因实验 | 第87页 |
| 4.3.9 免疫荧光 | 第87页 |
| 4.3.10 GST-pulldown | 第87-88页 |
| 4.3.11 实时定量PCR | 第88页 |
| 4.3.12 核质分离 | 第88页 |
| 4.3.13 染色质免疫共沉淀 | 第88-91页 |
| 4.3.14 SIRT1酶活测定 | 第91页 |
| 4.3.15 统计学分析 | 第91页 |
| 4.4 实验结果 | 第91-104页 |
| 4.4.1 CHES1对ERα蛋白水平的影响 | 第91-93页 |
| 4.4.2 CHES1对ERα二聚化以及亚细胞定位的影响 | 第93-94页 |
| 4.4.3 CHES1对ERα同HDAC1/HDAC2相互作用的影响 | 第94-96页 |
| 4.4.4 CHES1对ERα乙酰化修饰的影响 | 第96-97页 |
| 4.4.5 CHES1对ERα和SIRT1之间相互作用的影响 | 第97-98页 |
| 4.4.6 CHES1同SIRT1存在相互作用 | 第98-101页 |
| 4.4.7 CHES1和SIRT1对ERα转录活性的影响 | 第101-103页 |
| 4.4.8 CHES1对SIRT1酶活的影响 | 第103-104页 |
| 4.5 讨论 | 第104-105页 |
| 4.6 小结 | 第105-106页 |
| 5 E2-ERα信号通路对CHES1转录表达的影响 | 第106-119页 |
| 5.1 引言 | 第106页 |
| 5.2 仪器与材料 | 第106-107页 |
| 5.2.1 仪器 | 第106页 |
| 5.2.2 试剂 | 第106页 |
| 5.2.3 菌种、细胞、质粒及乳腺癌病人组织 | 第106-107页 |
| 5.3 实验方法 | 第107-111页 |
| 5.3.1 溶液配制 | 第107页 |
| 5.3.2 细胞培养 | 第107页 |
| 5.3.3 细胞转染 | 第107页 |
| 5.3.4 细胞裂解 | 第107页 |
| 5.3.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第107页 |
| 5.3.6 蛋白免疫印迹 | 第107页 |
| 5.3.7 实时定量PCR | 第107页 |
| 5.3.8 染色质免疫共沉淀 | 第107-108页 |
| 5.3.9 细胞全基因组DNA的提取 | 第108页 |
| 5.3.10 CHES1启动子报告基因质粒的构建 | 第108-109页 |
| 5.3.11 免疫组化 | 第109-111页 |
| 5.3.12 生物信息学分析 | 第111页 |
| 5.3.13 统计学分析 | 第111页 |
| 5.4 实验结果 | 第111-117页 |
| 5.4.1 在乳腺癌细胞中E2-ERα对CHES1表达的影响 | 第111-113页 |
| 5.4.2 E_2-ERα调节CHES1表达的分子机制 | 第113-115页 |
| 5.4.3 在乳腺癌中CHES1同ERα表达之间的相关性 | 第115-117页 |
| 5.5 讨论 | 第117-118页 |
| 5.6 小结 | 第118-119页 |
| 6 CHES1对ERα阳性乳腺癌细胞增殖和成瘤能力的影响 | 第119-132页 |
| 6.1 引言 | 第119页 |
| 6.2 仪器与材料 | 第119-120页 |
| 6.2.1 仪器 | 第119页 |
| 6.2.2 试剂 | 第119页 |
| 6.2.3 菌种、细胞、质粒、动物 | 第119-120页 |
| 6.3 实验方法 | 第120-122页 |
| 6.3.1 溶液配制 | 第120页 |
| 6.3.2 细胞培养 | 第120页 |
| 6.3.3 细胞转染 | 第120页 |
| 6.3.4 CCK8检测细胞生长曲线 | 第120页 |
| 6.3.5 细胞集落形成 | 第120页 |
| 6.3.6 软琼脂克隆形成 | 第120-121页 |
| 6.3.7 流式细胞测定细胞周期 | 第121页 |
| 6.3.8 裸鼠成瘤模型的构建 | 第121-122页 |
| 6.3.9 免疫组化 | 第122页 |
| 6.3.10 生物信息学分析 | 第122页 |
| 6.3.11 统计学分析 | 第122页 |
| 6.4 实验结果 | 第122-129页 |
| 6.4.1 CHES1对ERα阳性乳腺癌细胞增殖能力的影响 | 第122-125页 |
| 6.4.2 CHES1对ERα阳性乳腺癌细胞细胞周期的影响 | 第125页 |
| 6.4.3 CHES1对ERα阳性乳腺癌细胞成瘤能力的影响 | 第125-127页 |
| 6.4.4 CHES1表达同乳腺癌病人预后的相关性 | 第127-129页 |
| 6.5 讨论 | 第129-131页 |
| 6.6 小结 | 第131-132页 |
| 7 结论与展望 | 第132-135页 |
| 7.1 结论 | 第132-133页 |
| 7.2 创新点 | 第133页 |
| 7.3 展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第149-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
