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甲型副伤寒沙门菌与群体感应基因sdiA相互作用蛋白的筛选与鉴定

摘要第6-8页
ABSTRCAT第8-9页
缩略语索引第15-16页
第一章 绪论第16-23页
    1.1 甲型副伤寒沙门氏菌及生物膜相关研究第16页
    1.2 SdiA及群体感应第16-17页
    1.3 细菌双杂交系统及其应用第17-22页
        1.3.1 细菌双杂交原理第17-20页
        1.3.2 细菌双杂交系统的特点第20-21页
        1.3.3 细菌双杂交系统的应用第21-22页
    1.4 本文研究的背景及思路第22页
    1.5 本文研究的目的与意义第22-23页
第二章 甲型副伤寒沙门氏菌SdiA蛋白功能的研究第23-44页
    2.1 材料和方法第23-34页
        2.1.1 材料第23-28页
        2.1.2 方法第28-34页
    2.2 结果第34-41页
        2.2.1 sdiA缺失载体的构建与鉴定第34-36页
        2.2.2 sdiA缺失突变株的构建与鉴定第36-37页
        2.2.3 sdiA缺失突变菌株生长曲线的测定第37页
        2.2.4 sdiA缺失突变菌生物膜形成能力的测定第37-38页
        2.2.5 sdiA缺失突变菌对噬菌体特性的分析第38-40页
        2.2.6 sdiA缺失突变菌抗生素敏感性分析第40-41页
    2.3 讨论第41-42页
        2.3.1 sdiA敲除引物设计及基因敲除策略选择第41页
        2.3.2 sdiA缺失对形成生物膜的影响第41-42页
        2.3.3 sdiA缺失突变株对噬菌体的变化第42页
        2.3.4 sdiA缺失突变株对抗生素敏感性的分析第42页
    2.4 小结第42-44页
第三章 细菌双杂交系统诱饵质粒的构建第44-58页
    3.1 材料与方法第44-53页
        3.1.1 材料第44-47页
        3.1.2 方法第47-53页
    3.2 结果第53-56页
        3.2.1 目的基因sdiA的扩增第53页
        3.2.2 重组亚克隆载体的鉴定第53-54页
        3.2.3 重组诱饵载体的鉴定第54-55页
        3.2.4 重组诱饵载体的细胞毒性鉴定第55页
        3.2.5 重组诱饵载体的自激活鉴定第55-56页
    3.3 讨论第56-57页
        3.3.1 亚克隆载体的构建第56-57页
        3.3.2 诱饵质粒的构建第57页
        3.3.3 诱饵蛋白的毒性及自激活检测第57页
    3.4 小结第57-58页
第四章 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的构建第58-68页
    4.1 材料与方法第58-63页
        4.1.1 材料第58-59页
        4.1.2 方法第59-63页
    4.2 结果第63-66页
        4.2.1 电转感受态JM109转化效率的检测第63-64页
        4.2.2 甲型副伤寒沙门氏菌基因组酶切条件摸索第64页
        4.2.3 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的鉴定第64-66页
    4.3 讨论第66-67页
        4.3.1 电转感受态的制备第66页
        4.3.2 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的构建与评价第66-67页
    4.4 小结第67-68页
第五章 SdiA蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定第68-98页
    5.1 材料与方法第68-85页
        5.1.1 材料第68-73页
        5.1.2 方法第73-85页
    5.2 结果第85-96页
        5.2.1 细菌双杂交筛选第85-86页
        5.2.2 细菌双杂交筛选阳性克隆的初步验证第86-87页
        5.2.3 细菌双杂交筛选阳性克隆的回复验证及测序分析第87-88页
        5.2.4 诱饵蛋白His融合表达载体的构建与鉴定第88-91页
        5.2.5 靶蛋白c-Myc融合表达载体的构建与鉴定第91-92页
        5.2.6 SDS-PAGE及Western-blot检测诱饵蛋白及靶蛋白的表达第92-95页
        5.2.7 Co-IP验证诱饵蛋白与靶蛋白的相互作用第95-96页
    5.3 讨论第96-97页
        5.3.1 细菌双杂交的筛选、验证和测序结果分析第96页
        5.3.2 诱饵蛋白与靶蛋白的表达策略第96-97页
        5.3.3 免疫共沉淀第97页
    5.4 小结第97-98页
第六章 靶蛋白的功能研究第98-106页
    6.1 材料和方法第98-101页
        6.1.1 材料第98页
        6.1.2 方法第98-101页
    6.2 结果第101-104页
        6.2.1 突变载体的构建与鉴定第101-103页
        6.2.2 ybjZ缺失突变株的构建与鉴定第103-104页
        6.2.3 ybjZ缺失突变菌红霉素敏感性分析第104页
    6.3 讨论第104-105页
    6.4 小结第105-106页
全文总结第106-107页
展望第107-108页
致谢第108-109页
参考文献第109-113页
附录A 攻读硕士期间发表论文目录第113页

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