| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRCAT | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-23页 |
| 1.1 甲型副伤寒沙门氏菌及生物膜相关研究 | 第16页 |
| 1.2 SdiA及群体感应 | 第16-17页 |
| 1.3 细菌双杂交系统及其应用 | 第17-22页 |
| 1.3.1 细菌双杂交原理 | 第17-20页 |
| 1.3.2 细菌双杂交系统的特点 | 第20-21页 |
| 1.3.3 细菌双杂交系统的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 本文研究的背景及思路 | 第22页 |
| 1.5 本文研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 甲型副伤寒沙门氏菌SdiA蛋白功能的研究 | 第23-44页 |
| 2.1 材料和方法 | 第23-34页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-28页 |
| 2.1.2 方法 | 第28-34页 |
| 2.2 结果 | 第34-41页 |
| 2.2.1 sdiA缺失载体的构建与鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.2 sdiA缺失突变株的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.3 sdiA缺失突变菌株生长曲线的测定 | 第37页 |
| 2.2.4 sdiA缺失突变菌生物膜形成能力的测定 | 第37-38页 |
| 2.2.5 sdiA缺失突变菌对噬菌体特性的分析 | 第38-40页 |
| 2.2.6 sdiA缺失突变菌抗生素敏感性分析 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-42页 |
| 2.3.1 sdiA敲除引物设计及基因敲除策略选择 | 第41页 |
| 2.3.2 sdiA缺失对形成生物膜的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.3 sdiA缺失突变株对噬菌体的变化 | 第42页 |
| 2.3.4 sdiA缺失突变株对抗生素敏感性的分析 | 第42页 |
| 2.4 小结 | 第42-44页 |
| 第三章 细菌双杂交系统诱饵质粒的构建 | 第44-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-53页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-47页 |
| 3.1.2 方法 | 第47-53页 |
| 3.2 结果 | 第53-56页 |
| 3.2.1 目的基因sdiA的扩增 | 第53页 |
| 3.2.2 重组亚克隆载体的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.3 重组诱饵载体的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2.4 重组诱饵载体的细胞毒性鉴定 | 第55页 |
| 3.2.5 重组诱饵载体的自激活鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3 讨论 | 第56-57页 |
| 3.3.1 亚克隆载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.2 诱饵质粒的构建 | 第57页 |
| 3.3.3 诱饵蛋白的毒性及自激活检测 | 第57页 |
| 3.4 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的构建 | 第58-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第58-63页 |
| 4.1.1 材料 | 第58-59页 |
| 4.1.2 方法 | 第59-63页 |
| 4.2 结果 | 第63-66页 |
| 4.2.1 电转感受态JM109转化效率的检测 | 第63-64页 |
| 4.2.2 甲型副伤寒沙门氏菌基因组酶切条件摸索 | 第64页 |
| 4.2.3 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的鉴定 | 第64-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-67页 |
| 4.3.1 电转感受态的制备 | 第66页 |
| 4.3.2 甲型副伤寒沙门氏菌基因组文库的构建与评价 | 第66-67页 |
| 4.4 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 SdiA蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第68-98页 |
| 5.1 材料与方法 | 第68-85页 |
| 5.1.1 材料 | 第68-73页 |
| 5.1.2 方法 | 第73-85页 |
| 5.2 结果 | 第85-96页 |
| 5.2.1 细菌双杂交筛选 | 第85-86页 |
| 5.2.2 细菌双杂交筛选阳性克隆的初步验证 | 第86-87页 |
| 5.2.3 细菌双杂交筛选阳性克隆的回复验证及测序分析 | 第87-88页 |
| 5.2.4 诱饵蛋白His融合表达载体的构建与鉴定 | 第88-91页 |
| 5.2.5 靶蛋白c-Myc融合表达载体的构建与鉴定 | 第91-92页 |
| 5.2.6 SDS-PAGE及Western-blot检测诱饵蛋白及靶蛋白的表达 | 第92-95页 |
| 5.2.7 Co-IP验证诱饵蛋白与靶蛋白的相互作用 | 第95-96页 |
| 5.3 讨论 | 第96-97页 |
| 5.3.1 细菌双杂交的筛选、验证和测序结果分析 | 第96页 |
| 5.3.2 诱饵蛋白与靶蛋白的表达策略 | 第96-97页 |
| 5.3.3 免疫共沉淀 | 第97页 |
| 5.4 小结 | 第97-98页 |
| 第六章 靶蛋白的功能研究 | 第98-106页 |
| 6.1 材料和方法 | 第98-101页 |
| 6.1.1 材料 | 第98页 |
| 6.1.2 方法 | 第98-101页 |
| 6.2 结果 | 第101-104页 |
| 6.2.1 突变载体的构建与鉴定 | 第101-103页 |
| 6.2.2 ybjZ缺失突变株的构建与鉴定 | 第103-104页 |
| 6.2.3 ybjZ缺失突变菌红霉素敏感性分析 | 第104页 |
| 6.3 讨论 | 第104-105页 |
| 6.4 小结 | 第105-106页 |
| 全文总结 | 第106-107页 |
| 展望 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第113页 |
