| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-50页 |
| 第一节 根结线虫效应分子的研究概况 | 第16-26页 |
| 1 根结线虫的侵染循环 | 第16-18页 |
| 2 根结线虫的效应分子研究进展 | 第18-26页 |
| 2.1 作用于植物细胞壁的效应分子 | 第19-21页 |
| 2.2 作用于植物细胞生理代谢的效应分子 | 第21-24页 |
| 2.3 介导不亲和互作的效应分子 | 第24-26页 |
| 第二节 根结线虫分支酸变位酶的研究概况 | 第26-32页 |
| 1 植物莽草酸途径 | 第26-28页 |
| 1.1 水杨酸的合成 | 第26-27页 |
| 1.2 水杨酸参与植物抗病性 | 第27-28页 |
| 2 线虫侵染对水杨酸介导信号通路的影响 | 第28页 |
| 3 植物线虫分泌的分支酸变位酶 | 第28-32页 |
| 第三节 植物线虫效应分子功能的研究手段 | 第32-47页 |
| 1 植物线虫基因组学的研究 | 第32-34页 |
| 2 植物线虫分泌蛋白的研究 | 第34-36页 |
| 3 植物线虫的RNAi研究 | 第36-47页 |
| 3.1 植物寄生线虫的离体RNAi | 第38-42页 |
| 3.2 植物介导的活体内RNAi | 第42-44页 |
| 3.3 TRV介导的线虫基因沉默 | 第44-45页 |
| 3.4 参与线虫互作的植物基因沉默 | 第45-47页 |
| 本研究的目的及意义 | 第47页 |
| 主要研究内容 | 第47-48页 |
| 研究思路 | 第48-50页 |
| 第二章 效应分子Mi-CM-1和Mi-CM-3的分支酸变位酶活性验证 | 第50-72页 |
| 1 材料与方法 | 第52-61页 |
| 1.1 试剂材料 | 第52页 |
| 1.2 大肠杆菌CM缺失突变体JP2261的回补 | 第52-55页 |
| 1.3 水稻黄单胞菌cm缺失突变体的构建 | 第55-58页 |
| 1.4 水稻黄单胞菌cm缺失突变体的回补 | 第58-59页 |
| 1.5 测定PXO99~Acm缺失突变体及回补子对寄主水稻的致病性 | 第59页 |
| 1.6 测定非寄主植物烟草对PXO99~A cm缺失突变体及回补子的抗病性 | 第59-61页 |
| 1.7 统计方差分析 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-70页 |
| 2.1 大肠杆菌cm缺失突变体JP2261的回补 | 第61-63页 |
| 2.2 水稻黄单胞菌CM基因缺失突变体的构建 | 第63-65页 |
| 2.3 水稻黄单胞菌PXO99~A cm基因的回补与验证 | 第65-66页 |
| 2.4 PXO99~A cm缺失突变体及回补子的Southern blot验证 | 第66-67页 |
| 2.5 PXO99~A cm缺失突变体及回补子对水稻的致病力 | 第67-68页 |
| 2.6 PXO99~A cm缺失突变体及回补子激发烟草HR反应的能力 | 第68页 |
| 2.7 烟草抗病相关基因的转录水平 | 第68-70页 |
| 2.8 烟草叶片PAL的比活力 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 第三章 Mi-cm-1和Mi-cm-3的发育表达模式和RNAi研究 | 第72-90页 |
| 1 材料与方法 | 第73-80页 |
| 1.1 供试材料 | 第73-74页 |
| 1.2 Mi-cm-1和Mi-cm-3的发育表达模式分析 | 第74-75页 |
| 1.3 分支酸变位酶基因的离体RNAi | 第75-77页 |
| 1.4 TRV介导的分支酸变位酶基因RNAi | 第77-80页 |
| 1.5 统计方差分析 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-88页 |
| 2.1 Mi-cm-1与Mi-cm-3的发育表达模式 | 第80-81页 |
| 2.2 南方根结线虫Mi-cm-1和Mi-cm-3的离体RNAi | 第81-83页 |
| 2.3 TRV介导南方根结线虫Mi-cm-1与Mi-cm-3的RNAi | 第83-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 第四章 过表达Mi-cm-1和Mi-cm-3对烟草生长发育及线虫侵染的影响 | 第90-102页 |
| 1 材料与方法 | 第91-96页 |
| 1.1 供试材料 | 第91-92页 |
| 1.2 植物表达载体的构建和农杆菌的转化 | 第92-93页 |
| 1.3 含过表达载体的农杆菌介导烟草转化 | 第93-94页 |
| 1.4 转基因烟草的Southern blot验证 | 第94-95页 |
| 1.5 转基因烟草的RT-PCR检测 | 第95页 |
| 1.6 转基因烟草植株的生长表型观察 | 第95页 |
| 1.7 南方根结线虫侵染转基因烟草的测定 | 第95页 |
| 1.8 统计方差分析 | 第95-96页 |
| 2 结果与分析 | 第96-100页 |
| 2.1 植物表达载体的构建与农杆菌转化 | 第96-97页 |
| 2.2 转基因烟草的生成与筛选 | 第97-98页 |
| 2.3 转基因烟草阳性株系的检测 | 第98页 |
| 2.4 过表达Mi-cm-1和Mi-cm-3对烟草生长发育的影响 | 第98-99页 |
| 2.5 根结线虫接种转基因烟草的表型分析 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 第五章 效应分子Mi-CM-1和Mi-CM-3对烟草抗性的影响 | 第102-118页 |
| 1 材料与方法 | 第104-107页 |
| 1.1 供试材料 | 第104-105页 |
| 1.2 植物瞬时表达载体的构建 | 第105页 |
| 1.3 测定Mi-cm-1和Mi-cm-3瞬时表达对flg22激发烟草PTI的影响 | 第105-106页 |
| 1.4 观察Mi-CM-1和Mi-CM-3对Bax介导细胞程序性死亡的影响 | 第106页 |
| 1.5 测定Mi-CM-1和Mi-CM-3对抗病相关基因转录水平及水杨酸积累的影响 | 第106-107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-115页 |
| 2.1 Mi-cm-1和Mi-cm-3植物表达载体的构建与农杆菌的转化 | 第107-108页 |
| 2.2 瞬时表达对烟草PTI相关基因表达水平的影响 | 第108-110页 |
| 2.3 瞬时表达对flg22激发烟草活性氧爆发的影响 | 第110页 |
| 2.4 瞬时表达对Bax介导的细胞程序性死亡的影响 | 第110-111页 |
| 2.5 瞬时表达对抗病相关基因转录水平的影响 | 第111-112页 |
| 2.6 瞬时表达对烟草抗病过程中水杨酸积累的影响 | 第112-115页 |
| 3 讨论 | 第115-118页 |
| 第六章 基于TRV介导的RNAi技术研究南方根结线虫Mi-vap-2的功能 | 第118-136页 |
| 1 材料和方法 | 第119-124页 |
| 1.1 实验材料 | 第119-121页 |
| 1.2 Mi-VAP-2及其同源蛋白的结构分析 | 第121页 |
| 1.3 TRV重组载体的构建 | 第121页 |
| 1.4 TRV重组载体转化农杆菌与接种烟草 | 第121页 |
| 1.5 重组TRV的检测 | 第121-122页 |
| 1.6 接种TRV烟草株系后南方根结线虫靶基因表达水平的检测 | 第122页 |
| 1.7 子代2龄幼虫Mi-VAP-2蛋白水平的ELISA分析 | 第122-123页 |
| 1.8 接种烟草的根结线虫表型观察 | 第123-124页 |
| 1.9 统计方差分析 | 第124页 |
| 2 结果与分析 | 第124-133页 |
| 2.1 Mi-VAP-2同源蛋白结构分析 | 第124页 |
| 2.2 TRV重组载体的构建 | 第124-125页 |
| 2.3 pTRV2重组载体的构建与农杆菌接种 | 第125-126页 |
| 2.4 农杆菌接种烟草及重组TRV的检测 | 第126-128页 |
| 2.5 线虫接种后Mi16D10与Mi-vap-2的转录水平分析 | 第128-130页 |
| 2.6 子代2龄幼虫Mi-VAP-2蛋白水平的ELISA分析 | 第130-131页 |
| 2.7 接种TRV烟草株系的南方根结线虫表型分析 | 第131-133页 |
| 2.8 接种野生型烟草的子代2龄幼虫表型分析 | 第133页 |
| 3 讨论 | 第133-136页 |
| 全文结论 | 第136-138页 |
| 主要创新点 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-158页 |
| 附录一 Mi-cm-3的ORF序列与编码蛋白序列 | 第158-160页 |
| 附录二 培养基及相关试剂的配制 | 第160-161页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第161-164页 |
| 致谢 | 第164页 |
