| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一部分 研究背景 | 第14-35页 |
| 第一章 CRISPR/Cas系统的研究进展 | 第14-25页 |
| 1.1 CRISPR/Cas系统的起源 | 第14-15页 |
| 1.2 CRISPR/Cas系统的分类 | 第15-16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统的作用原理 | 第16-18页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9的应用 | 第18-25页 |
| 第二章 基因治疗 | 第25-35页 |
| 2.1 基因治疗概述 | 第25-26页 |
| 2.2 结合基因编辑技术策略 | 第26-27页 |
| 2.3 基因治疗的应用 | 第27-28页 |
| 2.4 影响治疗效果的因素 | 第28-32页 |
| 2.5 临床转化的挑战 | 第32-35页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第35-63页 |
| 1 实验材料 | 第35-47页 |
| 1.1 主要实验试剂与试剂盒 | 第35-37页 |
| 1.2 主要实验材料 | 第37-38页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 1.4 主要应用软件和数据库 | 第39-40页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第40-47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-63页 |
| 2.1 体外Cas9 mRNA制备 | 第47-48页 |
| 2.2 体外sgRNA的制备 | 第48-50页 |
| 2.3 显微注射Cas mRNA及sgRNA | 第50页 |
| 2.4 基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.5 组织或细胞RNA的提取 | 第51页 |
| 2.6 In vitro检测切割及脱靶 | 第51-53页 |
| 2.7 腺病毒的扩增及纯化 | 第53-55页 |
| 2.8 腺相关病毒的包装及纯化 | 第55-58页 |
| 2.9 冰冻切片检测病毒感染肝脏效率 | 第58-59页 |
| 2.10 活体取肝检测病毒编辑效率 | 第59页 |
| 2.11 免疫组织化学染色 | 第59-60页 |
| 2.12 Masson染色 | 第60页 |
| 2.13 天狼猩红染色 | 第60-61页 |
| 2.14 血液指标检测肝功能 | 第61页 |
| 2.15 病毒介导的肝脏毒性检测 | 第61-62页 |
| 2.16 In vivo脱靶验证 | 第62-63页 |
| 第三部分 实验结果与讨论 | 第63-107页 |
| 第一章 Ⅰ型酪氨酸血症大鼠模型的构建 | 第63-71页 |
| 1. 引言 | 第63-65页 |
| 2. 实验结果 | 第65-70页 |
| 3. 小结 | 第70-71页 |
| 第二章 CRISPR/Cas系统介导成体大鼠Ⅰ型酪氨酸血症的治疗 | 第71-89页 |
| 1. 引言 | 第71-72页 |
| 2. 实验结果 | 第72-87页 |
| 3. 小结 | 第87-89页 |
| 第三章 腺相关病毒递送分段Cas9治疗大鼠Ⅰ型酪氨酸血症 | 第89-105页 |
| 1. 引言 | 第89页 |
| 2. 实验结果 | 第89-103页 |
| 3. 小结 | 第103-105页 |
| 第四章 总结与展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-116页 |
| 附录Ⅰ Cas9mRNA体外转录载体序列 | 第116-122页 |
| 附录Ⅱ On-target和Off-Target靶点序列 | 第122-123页 |
| 附录Ⅲ PCR扩增所用引物 | 第123-125页 |
| 附录Ⅳ Q-PCR所用引物 | 第125-126页 |
| 附录Ⅴ 缩略词汇总 | 第126-128页 |
| 附录Ⅵ 研究生期间取得的成果 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
