| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一部分 P53在AGES诱导的胰岛B细胞凋亡中的作用和机制研究 | 第11-71页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-38页 |
| 1 实验材料 | 第13-15页 |
| 1.1 仪器设备 | 第13-14页 |
| 1.2 试剂与抗体 | 第14-15页 |
| 1.3 其他 | 第15页 |
| 2 实验方法 | 第15-38页 |
| 2.1 细胞培养及处理 | 第15-16页 |
| 2.2 大鼠原代胰岛的分离 | 第16-18页 |
| 2.3 基因转导 | 第18-19页 |
| 2.4 细胞增殖和凋亡检测 | 第19-21页 |
| 2.5 RNA提取及荧光定量分析 | 第21-24页 |
| 2.6 蛋白提取及Western Blot检测分析 | 第24-29页 |
| 2.7 质粒构建 | 第29-31页 |
| 2.8 荧光素酶报告基因实验 | 第31-32页 |
| 2.9 RNA干扰片段的合成和设计 | 第32页 |
| 2.10 p53干扰腺病毒构建 | 第32-34页 |
| 2.11 胞浆胞核蛋白提取 | 第34-35页 |
| 2.12 凝胶迁移或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第35-36页 |
| 2.13 细胞免疫荧光染色 | 第36-37页 |
| 2.14 统计学分析 | 第37-38页 |
| 结果 | 第38-58页 |
| 1. GS可以影响细胞周期相关蛋白的表达 | 第38-39页 |
| 2. GS增加p53的转录活性 | 第39-42页 |
| 3. GS对p53的mRNA转录和蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| 4. GS诱导p53发生细胞内定位变化 | 第44-46页 |
| 5. RSV可以增加p53的转录活性和蛋白表达 | 第46-48页 |
| 6. 增加p53的活性可以加重GS诱导的β细胞凋亡 | 第48-51页 |
| 7. 干扰p53对GS诱导的β细胞凋亡有保护作用 | 第51-54页 |
| 8. 线粒体功能的恢复对GS诱导的β细胞凋亡有保护作用 | 第54-58页 |
| 讨论 | 第58-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 第二部分 IGF1R在AGES诱导的胰岛B细胞凋亡中的作用和机制研究 | 第71-131页 |
| 前言 | 第71-74页 |
| 材料与方法 | 第74-87页 |
| 1 实验材料 | 第74页 |
| 1.1 仪器设备 | 第74页 |
| 1.2 试剂来源 | 第74页 |
| 1.3 其他 | 第74页 |
| 2 实验方法 | 第74-87页 |
| 2.1 细胞培养及处理 | 第74-75页 |
| 2.2 动物实验 | 第75-78页 |
| 2.3 大鼠原代胰岛的分离和培养 | 第78页 |
| 2.4 细胞增殖和凋亡检测 | 第78页 |
| 2.5 RNA提取及荧光定量分析 | 第78-79页 |
| 2.6 蛋白提取及Western Blot检测分析 | 第79页 |
| 2.7 荧光素酶报告基因实验 | 第79页 |
| 2.8 RNA干扰片段的合成和设计 | 第79-80页 |
| 2.9 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第80-85页 |
| 2.10 蛋白质免疫共沉淀(Co-Immunoprecipition) | 第85-86页 |
| 2.11 细胞免疫荧光 | 第86页 |
| 2.12 统计学分析 | 第86-87页 |
| 结果 | 第87-115页 |
| 1. GS对胰岛β细胞存活的影响 | 第87-89页 |
| 2. IGF1R与RAGE存在相互作用 | 第89-91页 |
| 3. GS能够降低IGF1R的表达水平 | 第91-92页 |
| 4. IGF1R在胰岛β细胞中的作用 | 第92-94页 |
| 5. IGF1R在GS引起的β细胞损伤中的作用 | 第94-96页 |
| 6. GS对胰岛β细胞AKT信号通路的影响 | 第96-98页 |
| 7. AKT信号激活在GS诱导的β细胞损伤中的作用 | 第98-100页 |
| 8. TRO对GS引起的AKT信号通路激活的影响 | 第100-102页 |
| 9. TRO在GS诱导的β细胞损伤中的作用 | 第102-104页 |
| 10. TRO对胰岛β细胞中IGF1R表达水平的影响 | 第104-106页 |
| 11. GS不是通过泛素蛋白酶体途径影响IGF1R的表达 | 第106页 |
| 12. 转录因子FOXO1与IGF1R启动子区结合,调控其表达 | 第106-110页 |
| 13. 在2型糖尿病大鼠模型对体外实验结果进行验证 | 第110-115页 |
| 讨论 | 第115-121页 |
| 结论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-131页 |
| 综述 | 第131-151页 |
| 参考文献 | 第139-151页 |
| 附录 | 第151-154页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第154-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
