| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 第—章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 引言 | 第10页 |
| 2 动物季节性繁殖 | 第10-13页 |
| 2.1 季节性繁殖相关概念 | 第10页 |
| 2.2 季节性繁殖的调节机制 | 第10-11页 |
| 2.3 MLT与动物繁殖 | 第11-12页 |
| 2.4 AANAT基因的研究进展 | 第12-13页 |
| 2.4.1 AANAT基因概述 | 第12页 |
| 2.4.2 AANAT基因的多态性研究 | 第12页 |
| 2.4.3 AANAT基因功能 | 第12-13页 |
| 3 miRNA的研究进展 | 第13-20页 |
| 3.1 miRNA的发现 | 第13页 |
| 3.2 miRNA的产生与作用机制 | 第13-14页 |
| 3.3 miRNA的检测方法 | 第14-16页 |
| 3.3.1 基于扩增反应的检测技术 | 第14-15页 |
| 3.3.2 基于探针杂交的检测技术 | 第15-16页 |
| 3.4 miRNA靶基因的预测 | 第16页 |
| 3.5 miRNA靶基因的验证 | 第16-17页 |
| 3.5.1 荧光定量PCR | 第16-17页 |
| 3.5.2 Western blot | 第17页 |
| 3.5.3 双荧光素酶报告基因系统 | 第17页 |
| 3.6 miRNA的生物学功能 | 第17-20页 |
| 3.6.1 miRNA与生长发育 | 第17-18页 |
| 3.6.2 miRNA与昼夜节律 | 第18页 |
| 3.6.3 miRNA与疾病 | 第18-19页 |
| 3.6.4 miRNA与繁殖性能 | 第19-20页 |
| 4 课题的目的及意义 | 第20页 |
| 5 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 AANAT与miRNAs表达量分析及靶关系预测 | 第21-36页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 实验动物及样品采集 | 第21页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 1.4 其他相关试剂配制 | 第22页 |
| 1.5 分析软件 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.1 组织总RNA提取 | 第23页 |
| 2.2 引物设计 | 第23-25页 |
| 2.2.1 AANAT引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.2 miRNA引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3 RT-qPCR | 第25-26页 |
| 2.3.1 RT反应 | 第25-26页 |
| 2.3.2 荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.4 数据分析 | 第26-27页 |
| 2.5 靶基因预测 | 第27-29页 |
| 2.5.1 AANAT 3'-UTR扩增 | 第27-28页 |
| 2.5.2 靶结合位点预测 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 3.1 总RNA提取与检测 | 第29页 |
| 3.2 AANAT和候选miRNAs表达情况 | 第29-33页 |
| 3.2.1 荧光定量结果 | 第29-32页 |
| 3.2.2 AANAT和miRNA的相对表达水平 | 第32-33页 |
| 3.2.2.1 AANAT在绵羊松果体发情周期不同阶段的表达水平 | 第32页 |
| 3.2.2.2 miRNA在绵羊松果体发情周期不同阶段的表达水平 | 第32-33页 |
| 3.2.2.3 AANAT和miRNA表达关系 | 第33页 |
| 3.3 AANAT 3'-UTR序列 | 第33-34页 |
| 3.4 预测靶基因 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 AANAT与miR-118,-247靶关系验证 | 第36-49页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.1 细胞系和载体 | 第36页 |
| 1.2 主要仪器 | 第36页 |
| 1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第37页 |
| 1.5 统计分析 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-44页 |
| 2.1 AANAT载体构建 | 第37-40页 |
| 2.2 pre-miRNA表达载体构建 | 第40-42页 |
| 2.3 质粒扩繁及提取 | 第42页 |
| 2.4 细胞培养 | 第42-43页 |
| 2.4.1 细胞复苏 | 第42-43页 |
| 2.4.2 细胞传代 | 第43页 |
| 2.5 细胞转染 | 第43页 |
| 2.6 荧光素酶活性检测 | 第43-44页 |
| 2.7 细胞总RNA提取 | 第44页 |
| 2.8 荧光定量 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 重组质粒酶切鉴定结果 | 第44页 |
| 3.2 转染效果 | 第44-46页 |
| 3.3 miR-118与AANAT靶关系验证结果 | 第46-47页 |
| 3.4 miR-247与AANAT靶关系验证结果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 全文结论 | 第49-50页 |
| 第五章 创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
