| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词对照表 | 第16-22页 |
| 1 文献综述 | 第22-41页 |
| 1.1 耐辐射奇球菌简介 | 第22-32页 |
| 1.1.1 耐辐射奇球菌的发现和一般特性 | 第22-23页 |
| 1.1.2 耐辐射奇球菌的基因组组成 | 第23-25页 |
| 1.1.3 耐辐射奇球菌极端抗性的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.1.4 耐辐射奇球菌的多层细胞外被结构 | 第30-32页 |
| 1.2 细菌中的外膜转运蛋白 | 第32-41页 |
| 1.2.1 两组分分泌系统 | 第32-33页 |
| 1.2.2 细菌外膜β桶装配组件(BAM)复合物 | 第33页 |
| 1.2.3 细菌外膜转运与装配组件(TAM) | 第33-34页 |
| 1.2.4 Omp85蛋白复合物的结构和进化 | 第34-38页 |
| 1.2.5 TAM复合物的研究进展 | 第38-41页 |
| 2 耐辐射奇球菌tamB同源基因重测序及序列分析 | 第41-62页 |
| 2.1 引言 | 第41页 |
| 2.2 材料与方法 | 第41-48页 |
| 2.2.1 主要实验试剂和仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.2 实验菌株及培养条件 | 第42页 |
| 2.2.3 野生型菌株R1基因组的提取 | 第42-44页 |
| 2.2.4 PCR引物设计及基因组分片段扩增 | 第44-45页 |
| 2.2.5 扩增产物纯化 | 第45页 |
| 2.2.6 各产物片段测序及测序结果拼接 | 第45-46页 |
| 2.2.7 ORF预测及同源建模预测二级结构 | 第46页 |
| 2.2.8 细胞外被的提取和蛋白质谱分析 | 第46-47页 |
| 2.2.9 进化树分析DR中TamB的进化亲缘关系 | 第47-48页 |
| 2.3 结果与分析 | 第48-60页 |
| 2.3.1 DR基因组中tamB同源基因预测 | 第48页 |
| 2.3.2 基因重测序结果与分析 | 第48-50页 |
| 2.3.3 操纵子DR_1462/1/0序列实际编码单一开放阅读框 | 第50-52页 |
| 2.3.4 DR_146T的结构域分析 | 第52-54页 |
| 2.3.5 DR_146T的二级结构预测 | 第54-55页 |
| 2.3.6 耐辐射奇球菌DR_146T蛋白的质谱分析验证 | 第55-59页 |
| 2.3.7 DR_146T的可能进化途径 | 第59-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-61页 |
| 2.5 小结 | 第61-62页 |
| 3 耐辐射奇球菌DR 146T在菌体细胞外被结构中的作用 | 第62-83页 |
| 3.1 引言 | 第62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-69页 |
| 3.2.1 实验菌株、质粒和主要试剂、仪器 | 第62-63页 |
| 3.2.2 构建基因敲除菌及敲除菌的验证 | 第63-64页 |
| 3.2.3 菌体生长曲线 | 第64页 |
| 3.2.4 电子显微镜分析细胞表面形态及细胞结构 | 第64-66页 |
| 3.2.5 渗透压抗性测定 | 第66页 |
| 3.2.6 氧化压力下菌体生存能力检测 | 第66-67页 |
| 3.2.7 细胞内金属离子含量测定 | 第67页 |
| 3.2.8 菌体的剪切力抗性测定 | 第67-69页 |
| 3.3 结果与分析 | 第69-79页 |
| 3.3.1 DR_146T缺失对菌落形态、细菌生长的影响 | 第69-71页 |
| 3.3.2 DR_146T对DR细胞外被的重要性 | 第71-74页 |
| 3.3.3 DR_146T敲除菌渗透压抗性降低 | 第74-76页 |
| 3.3.4 DR_146T敲除导致DR细胞对机械外力耐受能力下降 | 第76-77页 |
| 3.3.5 DR_146T敲除对菌体抗氧化能力的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.6 DR_146T基因敲除菌内Mn~(2+)含量升高 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 3.5 小结 | 第81-83页 |
| 4 DR_146T与细胞表面层蛋白的关系研究 | 第83-105页 |
| 4.1 引言 | 第83页 |
| 4.2 材料与方法 | 第83-87页 |
| 4.2.1 实验试剂和仪器 | 第83-84页 |
| 4.2.2 细胞外被组分分离 | 第84页 |
| 4.2.3 突变株细胞外被脱落层分离 | 第84页 |
| 4.2.4 细菌培养物上清分离与浓缩 | 第84页 |
| 4.2.5 SDS-PAGE分析细胞外被、脱落层和培养物上清中蛋白成分 | 第84-85页 |
| 4.2.6 质谱分析细胞外被、脱落层和培养物上清中蛋白成分 | 第85-86页 |
| 4.2.7 Western Blot检测蛋白表达水平 | 第86-87页 |
| 4.3 结果与分析 | 第87-100页 |
| 4.3.1 DR细胞外被蛋白组质谱鉴定 | 第87-92页 |
| 4.3.2 DR_146T突变株细胞外被脱落组分的蛋白鉴定 | 第92-99页 |
| 4.3.3 DR_146T与SlpA蛋白的关系 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-103页 |
| 4.5 小结 | 第103-105页 |
| 5 耐辐射奇球菌BamA同源基因的初步研究 | 第105-118页 |
| 5.1 引言 | 第105页 |
| 5.2 材料与方法 | 第105-107页 |
| 5.2.1 实验试剂和仪器 | 第105页 |
| 5.2.2 △DR_0379突变株构建与表型分析 | 第105页 |
| 5.2.3 细胞内金属离子含量测定 | 第105-107页 |
| 5.2.4 电子显微镜分析突变株超微结构 | 第107页 |
| 5.3 结果与分析 | 第107-114页 |
| 5.3.1 突变株△DR_0379的构建和验证 | 第107-108页 |
| 5.3.3 △DR_0379的细胞显微结构分析 | 第108-111页 |
| 5.3.4 △DR_0379对菌体环境压力抗性的影响 | 第111-114页 |
| 5.4 讨论 | 第114-116页 |
| 5.5 小结 | 第116-118页 |
| 6 总结与展望 | 第118-120页 |
| 6.1 总结 | 第118-119页 |
| 6.2 展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-131页 |
| 附录 | 第131-133页 |
| 博士期间发表的论文 | 第133页 |
