| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-20页 |
| NDV分子生物学特征 | 第15-16页 |
| 新城疫耐热弱毒活疫苗研发与应用 | 第16-17页 |
| 新城疫病毒耐热机理相关研究 | 第17-19页 |
| 生物信息学分析技术与NDV基因结构与功能研究 | 第19-20页 |
| 第一章 HR09株囊膜蛋白基因遗传变异规律与序列比较 | 第20-37页 |
| 1.1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 毒株 | 第20页 |
| 1.1.2 鸡胚 | 第20页 |
| 1.1.3 主要实验试剂 | 第20页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.1.5 基因序列 | 第21页 |
| 1.2 方法 | 第21-24页 |
| 1.2.1 耐热传代 | 第21-22页 |
| 1.2.2 HR09耐热传代株F、HN基因序列测定 | 第22-24页 |
| 1.2.2.1 引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 1.2.2.2 病毒RNA的提取及RT-PCR | 第23页 |
| 1.2.2.3 目的片段的克隆与鉴定 | 第23-24页 |
| 1.2.2.4 目的片段序列测定与分析 | 第24页 |
| 1.2.3 核酸序列分析与比较 | 第24页 |
| 1.2.4 氨基酸序列分析与比较 | 第24页 |
| 1.3 结果 | 第24-35页 |
| 1.3.1 耐热传代结果 | 第24-25页 |
| 1.3.2 HR09株耐热5、20、30代F、HN基因序列测定结果 | 第25页 |
| 1.3.3 HR09株耐热5、20、30代F、HN基因序列分析 | 第25-27页 |
| 1.3.4 不同耐热性NDV毒株F、HN基因序列的比较 | 第27-33页 |
| 1.3.4.1 GC含量分析 | 第27-30页 |
| 1.3.4.2 同源性分析 | 第30-31页 |
| 1.3.4.3 系统进化分析 | 第31-33页 |
| 1.3.5 不同耐热性NDV毒株F、HN蛋白氨基酸序列比较 | 第33-35页 |
| 1.3.5.1 同源性分析 | 第33-34页 |
| 1.3.5.2 氨基酸组成分析 | 第34-35页 |
| 1.4 讨论与小结 | 第35-37页 |
| 第二章 F、HN蛋白结构模拟与分析 | 第37-51页 |
| 2.1 材料 | 第37页 |
| 2.2 方法 | 第37-38页 |
| 2.2.1 二级结构预测模拟 | 第37-38页 |
| 2.2.2 三级结构同源建模 | 第38页 |
| 2.3 结果 | 第38-49页 |
| 2.3.1 F、HN蛋白二级结构分析 | 第38-41页 |
| 2.3.1.1 螺旋结构数量和位置分析 | 第38-39页 |
| 2.3.1.2 折叠结构数量和位置分析 | 第39页 |
| 2.3.1.3 无规则卷曲数量和位置分析 | 第39-41页 |
| 2.3.2 F、HN蛋白三级结构模拟及分析 | 第41-47页 |
| 2.3.2.1 F蛋白三级结构分析 | 第41-45页 |
| 2.3.2.2 HN蛋白三级结构分析 | 第45-47页 |
| 2.3.3 HR09株与LaSota株F、HN蛋白中脯氨酸位置分析 | 第47-49页 |
| 2.3.3.1 F蛋白中脯氨酸位置分析 | 第48页 |
| 2.3.3.2 HN蛋白中脯氨酸位置分析 | 第48-49页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第49-51页 |
| 第三章 rHR09-LaSota-F嵌合病毒基因组全长克隆的构建 | 第51-62页 |
| 3.1 材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 生物材料 | 第51页 |
| 3.1.2 鸡胚及细胞 | 第51页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第51页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 3.2 方法 | 第52-56页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第52-53页 |
| 3.2.2 rHR09-LaSota-F嵌合病毒的构建 | 第53-56页 |
| 3.2.2.1 rHR09-R2-LaSota-F质粒的构建 | 第53-56页 |
| 3.2.2.1.1 R2-1和R2-2片段扩增 | 第53-54页 |
| 3.2.2.1.2 LaSota-F片段扩增 | 第54页 |
| 3.2.2.1.3 R2-1、LaSota-F及R2-2片段的连接 | 第54-55页 |
| 3.2.2.1.4 T-R1与rR2-LaSota-F片段的连接 | 第55页 |
| 3.2.2.1.5 rR12-LaSota-F与T-R3片段的连接 | 第55-56页 |
| 3.2.2.1.6 rR123-LaSota-F与T-L2片段的连接 | 第56页 |
| 3.2.2.1.7 rTM-LaSota-F与首尾片段的连接 | 第56页 |
| 3.2.2.1.8 嵌合病毒rHR09-LaSota-F的鉴定 | 第56页 |
| 3.2.2.1.9 嵌合病毒rHR09-LaSota-F的拯救 | 第56页 |
| 3.3 结果 | 第56-61页 |
| 3.3.1 LaSota-F基因扩增与rR2-LaSota-F质粒构建结果及鉴定 | 第56-58页 |
| 3.3.2 rR12-LaSota-F质粒构建结果及鉴定 | 第58页 |
| 3.3.3 rR123-LaSota-F质粒构建结果及鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3.4 rTM-LaSota-F质粒构建结果及鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.5 rHR09-LaSota-F质粒构建结果及鉴定 | 第60页 |
| 3.3.6 rHR09-LaSota-F嵌合病毒基因全长鉴定结果 | 第60-61页 |
| 3.3.7 rHR09-LaSota-F嵌合病毒拯救结果 | 第61页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第61-62页 |
| 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 附录1 HR09耐热处理第5、20、30代F、HN基因测序结果 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
