| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 铜绿丽金龟的研究概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 铜绿丽金龟的发生规律与为害 | 第11页 |
| 1.1.2 铜绿丽金龟的防治策略及措施 | 第11-13页 |
| 1.1 2.1 农业防治与物理防治 | 第12页 |
| 1.1.2.2 化学防治 | 第12页 |
| 1.1.2.3 生物防治 | 第12-13页 |
| 1.2 昆虫触角感受器 | 第13-15页 |
| 1.3 昆虫的嗅觉识别过程 | 第15-16页 |
| 1.4 昆虫气味结合蛋白 | 第16-18页 |
| 1.4.1 昆虫气味结合蛋白的种类 | 第16页 |
| 1.4.2 昆虫气味结合蛋白的一般结构特征 | 第16-17页 |
| 1.4.3 昆虫气味结合蛋白的结合机制 | 第17-18页 |
| 1.4.4 昆虫气味结合蛋白的生理功能 | 第18页 |
| 1.5 选题的目的与意义 | 第18页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第18-20页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第18-20页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 供试虫源 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 铜绿丽金龟雌虫触角全长 cDNA 文库构建 | 第21-26页 |
| 2.2.1.1 触角总 RNA 提取 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 反转录合成 cDNA 第一链 | 第22页 |
| 2.2.1.3 通过 LD-PCR 扩增合成 cDNA 第二链 | 第22-23页 |
| 2.2.1.4 蛋白酶 K 消化 | 第23页 |
| 2.2.1.5 Sfi I 酶消化 | 第23页 |
| 2.2.1.6 CHROMA SPIN-400 柱分级分离 cDNA 片段 | 第23-24页 |
| 2.2.1.7 cDNA 片段与λ TriplE×2 噬菌体载体连接 | 第24-25页 |
| 2.2.1.8 噬菌体包装 | 第25页 |
| 2.2.1.9 文库质量的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.1.10 文库扩增 | 第26页 |
| 2.2.1.11 噬菌体文库向质粒文库的转化 | 第26页 |
| 2.2.2 插入片段大小检测及序列筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.3 目的基因与 T 载体连接 | 第27-29页 |
| 2.2.3.1 特异性引物设计及目的基因 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 目的基因 PCR 产物回收 | 第28页 |
| 2.2.3.3 PCR 回收产物与 T 载体连接 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 重组质粒的转化 | 第29页 |
| 2.2.3.5 阳性克隆验证 | 第29页 |
| 2.2.4 表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4.1 质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 双酶切及连接体系 | 第30页 |
| 2.2.5 原核表达 | 第30-32页 |
| 2.2.5.1 重组质粒的转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 原核表达 | 第31页 |
| 2.2.5.3 SDS-PAGE 检测 | 第31页 |
| 2.2.5.4 电转印 | 第31页 |
| 2.2.5.5 Western blot | 第31-32页 |
| 2.2.6 蛋白纯化 | 第32-34页 |
| 2.2.6.1 原核表达 | 第32页 |
| 2.2.6.2 超声波破碎菌体 | 第32页 |
| 2.2.6.3 镍离子亲和层析柱纯化蛋白 | 第32-33页 |
| 2.2.6.4 蛋白透析和超滤 | 第33页 |
| 2.2.6.5 蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.2.6.6 His 标签的切除及纯化蛋白的获得 | 第34页 |
| 2.2.7 PBP1 和 PBP2 的结合特性分析 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-50页 |
| 3.1 铜绿丽金龟触角全长 cDNA 文库 | 第36-37页 |
| 3.1.1 铜绿丽金龟触角总 RNA 的提取质量检测 | 第36页 |
| 3.1.2 双链的合成 | 第36页 |
| 3.1.3 cDNA 分级分离检测 | 第36-37页 |
| 3.1.4 cDNA 文库的质量鉴定 | 第37页 |
| 3.1.4.1 文库库容量及重组率的检测 | 第37页 |
| 3.1.4.2 文库插入片段大小检测 | 第37页 |
| 3.2 筛选结果 | 第37-41页 |
| 3.3 目的基因与 pGEM-T 载体连接 | 第41-42页 |
| 3.3.1 AcorPBP1 和 AcorPBP2 序列扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.2 AcorPBP1 和 AcorPBP2 与 pGEM-T 载体重组质粒 PCR 检测 | 第42页 |
| 3.4 AcorPBP1 和 AcorPBP2 与 pET28a 表达载体构建 | 第42-43页 |
| 3.5 AcorPBP1 和 AcorPBP2 蛋白表达 | 第43-44页 |
| 3.6 AcorPBP1 和 AcorPBP2 的纯化 | 第44-46页 |
| 3.7 AcorPBP1 和 AcorPBP2 结合特性分析 | 第46-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-54页 |
| 5.1 提取总 RNA 材料的探讨 | 第52页 |
| 5.2 AcorPBP1 和 AcorPBP2 表现不同结合特性的影响因素探讨 | 第52页 |
| 5.3 AcorPBP1 和 AcorPBP2 的功能探讨 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
