| 第一部分 AP-1/miR-21介导的信号通路是肝细胞癌灌注化疗的靶点 | 第6-50页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 实验材料与方法 | 第10-32页 |
| 一、实验材料 | 第10-19页 |
| 1. 细胞系及组织标本 | 第10-11页 |
| 2. 培养基及血清等 | 第11页 |
| 2.1 细胞培养用 | 第11页 |
| 2.2 细菌培养用 | 第11页 |
| 3. 试剂盒 | 第11页 |
| 4. 其他生化试剂 | 第11-12页 |
| 5. 质粒 | 第12页 |
| 6. 菌种 | 第12页 |
| 7. 引物及探针 | 第12-19页 |
| 9. 主要仪器设备 | 第19页 |
| 10. 生物信息学软件等 | 第19页 |
| 二、实验方法 | 第19-32页 |
| 1. 细胞系的培养 | 第19-20页 |
| 1.1 细胞的培养 | 第19-20页 |
| 1.2 细胞的复苏 | 第20页 |
| 1.3 细胞的传代培养和换液 | 第20页 |
| 1.4 细胞的冻存 | 第20页 |
| 2. 化疗药物IC50的确定及细胞处理 | 第20-21页 |
| 2.1 化疗药物IC50的确定 | 第20-21页 |
| 2.2 化疗药物处理细胞 | 第21页 |
| 3. 细胞转染 | 第21-22页 |
| 3.1 方法一(按Effectence转染试剂盒说明进行) | 第21-22页 |
| 3.2 方法二(按Lipofectamine转染试剂盒说明书进行) | 第22页 |
| 4. RNA的提取及Real-time PCR | 第22-26页 |
| 4.1 细胞或组织总RNA的提取(Trizol法) | 第22-23页 |
| 4.2 RNA浓度测定及质量检测 | 第23页 |
| 4.3 逆转录(M-MLV合成cDNA的第一条链) | 第23-25页 |
| 4.4 Real-time RCR(SYBR Green法和Taqman探针法) | 第25-26页 |
| 5. Northern-blot | 第26-27页 |
| 6. 重组质粒的构建及质粒DNA的提取 | 第27-29页 |
| 6.1 重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 6.2 克隆质粒DNA的大量制备及纯化 | 第28-29页 |
| 7. 双荧光素酶报告基因实验 | 第29页 |
| 8. Western-Blot | 第29-30页 |
| 9. H&E染色和免疫组化分析 | 第30-31页 |
| 9.1 H&E染色 | 第30-31页 |
| 9.2 免疫组化 | 第31页 |
| 10. 功能实验 | 第31-32页 |
| 10.1 细胞凋亡实验 | 第31-32页 |
| 10.2 细胞侵袭实验(Transwell Migration Assay) | 第32页 |
| 结果 | 第32-48页 |
| 一、miR-21的异常表达与肝细胞癌的进展和预后有关 | 第32-37页 |
| 二、miR-21是肝细胞癌患者肝动脉灌注化疗的潜在指示因子 | 第37-38页 |
| 三、miR-21导致HCC细胞的化疗抵抗 | 第38-39页 |
| 四、化疗药物能抑制HCC细胞中miR-21的表达 | 第39-44页 |
| 五、化疗药物通过调节miR-21介导的调控网络抑制HCC的进展 | 第44-46页 |
| 六、药物调控的microRNA代表了肝细胞癌化疗的重要机制 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 第二部分 myoD-miR-29b2-c调控通路在肌肉细胞分化中的功能研究 | 第50-64页 |
| 摘要 | 第50-51页 |
| Abstract | 第51-52页 |
| 前言 | 第52-53页 |
| 实验材料和方法 | 第53-59页 |
| 一、实验材料 | 第53-54页 |
| 1. 细胞系 | 第53页 |
| 2. 细胞培养基及血清等 | 第53页 |
| 3. 引物和探针 | 第53-54页 |
| 4. 其他 | 第54页 |
| 二、实验方法 | 第54-59页 |
| 1. 细胞的培养和处理 | 第54-55页 |
| 2. RNA的的提取和Real-time PCR | 第55页 |
| 3. Western blot | 第55页 |
| 4. Northern blot | 第55页 |
| 5. 质粒构建和双荧光素酶报告基因分析 | 第55页 |
| 6. EMSA | 第55-57页 |
| 6.1 标记探针 | 第55-56页 |
| 6.2 配制EMSA胶 | 第56页 |
| 6.3 EMSA结合反应 | 第56-57页 |
| 6.4 电泳 | 第57页 |
| 6.5 EMSA胶的干燥及显影 | 第57页 |
| 7. 表达质粒的构建和重组腺病毒的包装 | 第57-59页 |
| 7.1 重组腺病毒的构建与包装 | 第57-58页 |
| 7.2 腺病毒的滴度测定 | 第58-59页 |
| 7.3 腺病毒感染细胞 | 第59页 |
| 结果 | 第59-63页 |
| 一、MyoD在胰岛素和葡萄糖处理的L6肌管中表达上调 | 第59-60页 |
| 二、miR-29家族在胰岛素和葡萄糖处理的L6肌管中表达上调 | 第60页 |
| 三、miR-29b2-c簇的表达受MyoD正向调节 | 第60-61页 |
| 四、MyoD的异常表达导致内源性miR-29b和miR-29c的表达增加 | 第61-63页 |
| 讨论 | 第63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 英文名词及缩写 | 第71-74页 |
| 文献综述 | 第74-81页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 发表和待发表的文章 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
