| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-21页 |
| ·液泡膜质子泵的结构及功能 | 第12-17页 |
| ·液泡膜质子泵的结构及活性调节 | 第12-16页 |
| ·液泡膜H~+_-ATPase | 第12-14页 |
| ·液泡膜H~+_-PPase | 第14-15页 |
| ·液泡膜H~+_-ATPase 和H~+_-PPase 的关系 | 第15-16页 |
| ·液泡膜质子泵的功能 | 第16-17页 |
| ·维持稳定的胞质和液泡液pH 值 | 第16页 |
| ·参与控制液泡膨压，维持细胞的体积 | 第16页 |
| ·促进多种离子和代谢产物的在液泡中的积累 | 第16-17页 |
| ·与植物激素相互作用，影响植物的生长发育 | 第17页 |
| ·液泡膜H~+_-PPase 对逆境的反应 | 第17-19页 |
| ·盐胁迫 | 第17-18页 |
| ·冷胁迫 | 第18页 |
| ·缺氧胁迫 | 第18-19页 |
| ·液泡膜H~+_-PPase 与生长素极性运输 | 第19-20页 |
| ·液泡膜H~+_-PPase 基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·试验材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料及处理 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·酶及生化试剂 | 第21页 |
| ·PCR 引物 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-33页 |
| ·植物材料总RNA 的提取 | 第22-24页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第24页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第24页 |
| ·cDNA 纯化(用于5′RACE) | 第24-25页 |
| ·cDNA 末端加尾(用于5′RACE) | 第25-26页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因的cDNA 全长序列的获得 | 第26-29页 |
| ·中间片段一的克隆 | 第26-27页 |
| ·基因中间片段二的克隆 | 第27页 |
| ·3′RACE 获得3′端序列 | 第27页 |
| ·5′RACE 获得5′端序列 | 第27-28页 |
| ·基因全长的获得 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第28-29页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化及筛选 | 第30页 |
| ·碱法质粒DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·DNA 序列测定 | 第31页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因反义表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因正义表达载体的构建 | 第32页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第32-33页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 序列的生物信息学分析 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-48页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因的分离 | 第33-37页 |
| ·RNA 的提取及反转录 | 第33-34页 |
| ·中间片段一和片段二的分离 | 第34-35页 |
| ·3′片段的分离 | 第35-36页 |
| ·5′片段的分离 | 第36页 |
| ·全长cDNA 的分离 | 第36-37页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因的序列分析 | 第37-42页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第37页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因氨基酸序列分析 | 第37-41页 |
| ·液泡膜焦磷酸酶系统进化树分析 | 第41-42页 |
| ·跨膜结构分析 | 第42页 |
| ·顺式作用元件分析 | 第42页 |
| ·黄瓜液泡膜H~+_-PPase 基因的组织表达分析 | 第42-44页 |
| ·在不同器官中表达 | 第42-43页 |
| ·NaCl 处理对黄瓜叶片CuPPase 表达的影响 | 第43页 |
| ·高低温处理对黄瓜叶片 CuPPase 表达的影响 | 第43-44页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因正反义表达载体的构建 | 第44-48页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因反义表达载体的构建 | 第44页 |
| ·黄瓜H~+_-PPase 基因正义表达载体的构建 | 第44-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| ·基因全长的获得 | 第48页 |
| ·顺式作用元件分析 | 第48页 |
| ·不同胁迫处理下黄瓜H~+_-PPase 基因的表达 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表的论文情况 | 第61页 |
