| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 ：miR-200家族靶向调控CRKL抑制肾癌细胞的迁移侵袭能力 | 第17-38页 |
| 材料方法 | 第17-26页 |
| 1.实验材料 | 第17-19页 |
| 2.实验方法 | 第19-26页 |
| 2.1 生物信息学软件分析miR-200家族和CRKL3’UTR的靶向关系 | 第19页 |
| 2.2 过表达miR-200家族对786-O和ACHN细胞迁移侵袭能力的影响 | 第19-22页 |
| 2.3 CRKL敲降对786-O和ACHN体外恶性表型的影响 | 第22-24页 |
| 2.4 miR-200家族水平变化对信号通路CRKL/SOS1/Ras/Raf/MMP9分子表达水平影响 | 第24-25页 |
| 2.5 双荧光素报告实验检测miR-200c/429与CRKL的靶向关系 | 第25-26页 |
| 2.6 统计学分析 | 第26页 |
| 结果 | 第26-34页 |
| 1.miR-200家族能够与CRKL的3’UTR区靶向结合的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.miR-200家族过表达抑制786-O和ACHN体外迁移侵袭能力 | 第27-30页 |
| 3.CRKL下调抑制786-O和ACHN细胞迁移侵袭和运动能力 | 第30-32页 |
| 4.miR-200家族通过调控CRKL/SOS1/MMP9表达水平影响肾癌细胞的EMT能力 | 第32-33页 |
| 5.双荧光素酶报告基因实验表明miR-200c/429与CRKL3’-UTR靶向结合 | 第33-34页 |
| 讨论 | 第34-35页 |
| 结论 | 第35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 第二部分 ：下调ETV6促进miR-200家族表达抑制肾癌细胞的迁移侵袭 | 第38-48页 |
| 材料方法 | 第38-42页 |
| 1.实验材料 | 第38-39页 |
| 2.实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 EVT6下调促进miR-200家族表达 | 第39-40页 |
| 2.2 下调ETV6抑制了786-O和ACHN细胞的迁移侵袭能力 | 第40页 |
| 2.3 下调ETV6和CRKL对EMT信号通路的影响 | 第40页 |
| 2.4 CoIP实验研究 ETV6和CRKL结合方式 | 第40-41页 |
| 2.5 CRKL下调对786-O中CRKL-ETV6复合物形成和发布的影响 | 第41-42页 |
| 结果 | 第42-46页 |
| 1.ETV6下调增强miR-200家族在肾癌细胞中表达水平 | 第42页 |
| 2.ETV6下调抑制786-O和ACHN细胞的迁移和侵袭能力 | 第42-44页 |
| 3.ETV6和CRKL下调通过SOS1/MMP9信号通路,抑制肾癌细胞EMT | 第44页 |
| 4.ETV6和CRKL直接作用 | 第44-45页 |
| 5.下调CRKL能够降低细胞核中ETV6-CRKL复合物,抑制miR-200家族表达 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第三部分 ：ccRCC临床样本中检测ETV6,miR-200家族和CRKL的表达及三者的相关性 | 第48-59页 |
| 材料方法 | 第48-49页 |
| 1.实验材料 | 第48页 |
| 2.实验方法 | 第48-49页 |
| 2.1 qRT-PCR测定ccRCC患者新鲜组织中miR-429,miR-200c,CRKL,ETV6的RNA表达水平 | 第48页 |
| 2.2 WB检测ccRCC患者新鲜组织中CRKL,ETV6,MMP9,SOS1的蛋白表达水平 | 第48-49页 |
| 结果 | 第49-56页 |
| 1.miR-429和miR-200c在ccRCC患者组织中低表达 | 第49-50页 |
| 2.在ccRCC中CRKL和ETV6的mRNA表达水平变化不明显 | 第50-51页 |
| 3.ccRCC患者组织中miR-200c/429的表达水平和CRKL及ETV6mRNA水平不相关 | 第51-52页 |
| 4.ccRCC患者组织中CRKL和ETV6的蛋白表达水平升高 | 第52-54页 |
| 5.SOS1,MMP9在ccRCC患者组织中高表达 | 第54-55页 |
| 6.在肾透明细胞癌中miR-200c/429和CRKL,ETV6的蛋白水平负相关 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 综述 | 第59-68页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
