| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 低剂量毒物兴奋效应 | 第8-10页 |
| 1.1.1 毒物兴奋效应的提出与特点 | 第8-9页 |
| 1.1.2 毒物兴奋效应的机制 | 第9-10页 |
| 1.2 Wnt/β-catenin 信号通路与 hormesis 的关系 | 第10-13页 |
| 1.2.1 Wnt/β-catenin 信号通路简介 | 第10-12页 |
| 1.2.2 Wnt/β-catenin 信号通路与肿瘤 | 第12页 |
| 1.2.3 Wnt/β-catenin 信号通路与 hormesis | 第12-13页 |
| 1.3 RNA 干扰技术 | 第13-16页 |
| 1.3.1 RNA 干扰技术原理 | 第13-14页 |
| 1.3.2 RNA 干扰策略 | 第14-16页 |
| 1.3.3 RNA 干扰的应用 | 第16页 |
| 1.4 实验研究内容 | 第16-18页 |
| 1.4.1 目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 实验材料及方法 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 受试物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第18-20页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2.1 细胞培养试剂的配制 | 第20页 |
| 2.2.2 质粒构建及转染试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法和步骤 | 第21-35页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.2 β-catenin-shRNA 的设计与合成 | 第21-23页 |
| 2.3.3 真核表达载体重组构建 | 第23-26页 |
| 2.3.4 基因干扰细胞转化 | 第26-27页 |
| 2.3.5 RT-PCR 检测重组质粒的干扰效率 | 第27-29页 |
| 2.3.6 Western blot 检测重组质粒的干扰效率 | 第29-30页 |
| 2.3.7 CCK-8 细胞增殖试验 | 第30-31页 |
| 2.3.8 荧光定量 PCR 检测目的基因 mRNA 表达 | 第31-34页 |
| 2.3.9 流式细胞术检测细胞周期 | 第34-35页 |
| 2.4 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 实验结果及分析 | 第36-47页 |
| 3.1 β-catenin 重组质粒的构建和转染 | 第36-39页 |
| 3.1.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| 3.1.2 荧光倒置显微镜观察转染效果 | 第36-37页 |
| 3.1.3 RT-PCR 检测 β-catenin 基因抑制效率 | 第37-38页 |
| 3.1.4 Western Blot 检测 β-catenin 蛋白抑制效率 | 第38-39页 |
| 3.2 氯化镉诱导 HEK293 细胞增殖的 hormesis | 第39-43页 |
| 3.2.1 氯化镉对正常 HEK293 细胞与基因干扰 HEK293 细胞相对增殖率的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.2 氯化镉诱导 HEK293 细胞增殖的毒物兴奋效应 | 第40-43页 |
| 3.2.3 干扰 β-catenin 基因对氯化镉诱导 HEK293 细胞增殖的毒物兴奋效应的影响 | 第43页 |
| 3.3 荧光定量 PCR 检测 Cyclin D1 与 c-myc 基因的表达 | 第43-45页 |
| 3.3.1 Cyclin D1 基因的表达 | 第43-44页 |
| 3.3.2 c-myc 基因的表达 | 第44-45页 |
| 3.4 流式细胞术检测细胞周期 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-53页 |
| 4.1 shRNA 质粒载体干扰 β-catenin 基因表达 | 第47页 |
| 4.2 氯化镉诱导 HEK293 细胞增殖的兴奋效应 | 第47-49页 |
| 4.3 Wnt/β-catenin 对氯化镉诱导 HEK293 细胞增殖的兴奋效应的作用 | 第49页 |
| 4.4 低剂量氯化镉对 Cyclin D1 与 c-myc 基因表达的影响 | 第49-51页 |
| 4.5 低剂量氯化镉对 HEK293 细胞周期的影响 | 第51页 |
| 4.6 小结 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 中英文缩略词表 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 在读期间发表的论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
