| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 SGR基因的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 SGR基因 | 第11页 |
| 1.1.2 叶绿素降解及SGR基因的功能 | 第11-12页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因编辑系统及其在植物中的应用 | 第12-14页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas基因编辑系统 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第13-14页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9基因编辑系统在植物中的应用 | 第14页 |
| 1.3 高羊茅及其基因工程研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 高羊茅 | 第14页 |
| 1.3.2 高羊茅基因工程的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 论文研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 第2章 高羊茅再生体系的建立和消毒方式的优化 | 第16-23页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 材料 | 第16页 |
| 2.1.2 再生体系建立 | 第16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 愈伤组织的诱导 | 第17页 |
| 2.2.2 愈伤诱导培养条件 | 第17页 |
| 2.2.3 再生体系的优化 | 第17-18页 |
| 2.2.4 最优消毒处理方式下不同品种高羊茅验证 | 第18页 |
| 2.2.5 测定指标 | 第18-19页 |
| 2.2.6 数据统计处理方法 | 第19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-22页 |
| 2.3.1 不同前处理方式对种子消毒效果的影响 | 第19-21页 |
| 2.3.2 不同高羊茅品种种子的发芽实验 | 第21页 |
| 2.3.3 最优消毒处理下不同高羊茅品种种子的表现 | 第21-22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-23页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9技术敲除高羊茅FaSGR基因载体构建 | 第23-34页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 3.2 方法 | 第24-30页 |
| 3.2.1 FaSGR基因CDS区相关外显子序列的确定 | 第24-26页 |
| 3.2.2 PCR产物测序 | 第26页 |
| 3.2.3 FaSGR基因的sgRNA靶点的设计和选择 | 第26-28页 |
| 3.2.4 FaSGR最终载体的构建 | 第28-30页 |
| 3.3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 3.3.1 目的片段的克隆与验证 | 第30页 |
| 3.3.2 预计条带的测序 | 第30-31页 |
| 3.3.3 FaSGR-gRNA靶点酶切验证 | 第31页 |
| 3.3.4 靶点体外切割活性检测 | 第31-32页 |
| 3.3.5 FaSGR质粒的构建 | 第32页 |
| 3.3.6 表达载体的鉴定和检测 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第4章 农杆菌介导遗传转化体系的建立 | 第34-47页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第34-35页 |
| 4.1.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第35页 |
| 4.2 方法 | 第35-38页 |
| 4.2.1 农杆菌细胞活化 | 第35页 |
| 4.2.2 冻融法转化的农杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 4.2.3 将FaSGR-Cas9表达载体转入农杆菌 | 第35-36页 |
| 4.2.4 农杆菌介导遗传转化 | 第36-37页 |
| 4.2.5 阳性植株的鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2.6 转基因株系基因表达量检测 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 4.3.1 FaSGR-Cas9表达载体转化农杆菌及其验证 | 第38-39页 |
| 4.3.2 卡那霉素浓度对农杆菌生长的影响 | 第39-40页 |
| 4.3.3 高羊茅愈伤组织对潮霉素的抗性 | 第40-41页 |
| 4.3.4 抗性愈伤的筛选、分化和生根 | 第41-43页 |
| 4.3.5 转基因植株的鉴定和检测 | 第43页 |
| 4.3.6 野生型株系和转基因株系中FaSGR基因表达量的检测 | 第43-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 总结 | 第47-49页 |
| 5.1 本研究主要结论 | 第47-48页 |
| 5.2 本研究特色与创新之处 | 第48页 |
| 5.3 后续研究工作展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
