| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 英文缩写词简表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 技术路线 | 第15-16页 |
| 1 材料与方法 | 第16-29页 |
| 1.1 材料 | 第16-21页 |
| 1.1.1 细胞系 | 第16页 |
| 1.1.2 载体 | 第16页 |
| 1.1.3 引物 | 第16-17页 |
| 1.1.4 主要试剂来源 | 第17-18页 |
| 1.1.5 抗体 | 第18页 |
| 1.1.6 主要试剂配制 | 第18-20页 |
| 1.1.7 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 方法 | 第21-29页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第21页 |
| 1.2.2 重组病毒滴度测定 | 第21页 |
| 1.2.3 ARH-77悬浮细胞的感染 | 第21-22页 |
| 1.2.4 RT-PCR与定量RT-PCR分析 | 第22-24页 |
| 1.2.5 细胞蛋白水平测定 | 第24-26页 |
| 1.2.6 细胞增殖能力检测 | 第26-27页 |
| 1.2.7 软琼脂集落形成实验 | 第27-28页 |
| 1.2.8 流式细胞术检测 | 第28-29页 |
| 1.2.8.1 细胞周期检测 | 第28页 |
| 1.2.8.2 细胞凋亡检测 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29-41页 |
| 2.1 Real time PCR法测定病毒滴度 | 第29-30页 |
| 2.2 构建稳定表达的ARH-77/Clorf35-knockdown细胞株 | 第30页 |
| 2.3 慢病毒干扰后,检测ARH-77/Clorf35-knockdown细胞株Clorf35、c-myc基因的表达情况 | 第30-34页 |
| 2.3.1 白光下细胞的生长状态 | 第30-31页 |
| 2.3.2 RT-PCR检测细胞内Clorf35、c-myc、β-actin基因的表达情况 | 第31-32页 |
| 2.3.3 qRT-PCR检测细胞内Clorf35、c-myc、β-actin基因的表达情况 | 第32-34页 |
| 2.3.4 Western Blotting检测细胞内Clorf35、c-myc、β-actin蛋白的表达情况 | 第34页 |
| 2.4. 细胞增殖能力的检测 | 第34-41页 |
| 2.4.1 Clorf35基因被干扰后对骨髓瘤ARH-77细胞生长增殖的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.2 流式细胞软件ModFit分析检测细胞周期和凋亡情况 | 第35-38页 |
| 2.4.3 软琼脂集落实验 | 第38-39页 |
| 2.4.4 Western Blotting检测细胞周期相关蛋白Cyclin E、CDK2和p27表达情况 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 综述 | 第52-59页 |
| References | 第57-59页 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
