| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第10-14页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第17-21页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 小鼠、细胞、质粒 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2.2.1 脂质体转染法转染 | 第21页 |
| 2.2.2 蛋白提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 免疫印记 | 第22-24页 |
| 2.2.4 体内GST-pulldown | 第24-25页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀 | 第25-26页 |
| 2.2.6 免疫组化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 慢病毒感染 | 第27-28页 |
| 2.2.8 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.2.9 重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.10 SMC1乙酰化位点死型的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.11 细胞周期G2/M阻滞的方法 | 第32页 |
| 2.2.12 细胞凋亡PI/FITC实验方法： | 第32页 |
| 2.2.13 皮下注射裸鼠成瘤BABL/C实验方法： | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-58页 |
| 3.1 SIRT2与SMC1相互作用 | 第33-37页 |
| 3.1.1 质谱检测SIRT2与SMC1相互作用 | 第33-34页 |
| 3.1.2 体内SIRT2与SMC1互作 | 第34页 |
| 3.1.3 体外SIRT2与SMC1直接相互作用 | 第34-35页 |
| 3.1.4 氧自由基压力下,SIRT2与SMC1互作增强 | 第35-37页 |
| 3.2 SMC1在细胞内可以被乙酰化修饰 | 第37-38页 |
| 3.2.1 内源性SMC1是乙酰化修饰的蛋白 | 第37页 |
| 3.2.2 HDAC抑制剂提高SMC1乙酰化水平 | 第37-38页 |
| 3.3 SIRT2是SMC1的去乙酰化酶 | 第38-41页 |
| 3.3.1 内源性SIRT2能够调控SMC1乙酰化水平 | 第38-39页 |
| 3.3.2 氧化应激下SIRT2使得SMC1乙酰化水平降低 | 第39-40页 |
| 3.3.3 SIRT2调控SMC1乙酰化水平依赖其催化活性 | 第40-41页 |
| 3.4 SIRT2去乙酰化SMC1的位点是Lys508Lys579Lys | 第41-44页 |
| 3.4.1 SIRT2去乙酰化SMC1的位点是Lys508Lys579Lys | 第41-42页 |
| 3.4.2 SMC1位点Lys508Lys579Lys805抗体特异性良好 | 第42页 |
| 3.4.3 SMC1位点Lys579受SIRT2调控 | 第42-44页 |
| 3.5 CBP是SMC1的乙酰基转移酶 | 第44-46页 |
| 3.5.1 CBP是SMC1乙酰基转移酶 | 第44-46页 |
| 3.5.2 CBP和SMC1具有相互作用 | 第46页 |
| 3.6 SIRT2对SMC1去乙酰化修饰促进其磷酸化的发生 | 第46-54页 |
| 3.6.1 氧自由基压力下,SIRT2缺失降低了SMC1磷酸化水平 | 第47页 |
| 3.6.2 氧自由基压力下,SIRT2活性缺失降低了SMC1磷酸化水平 | 第47-48页 |
| 3.6.3 氧自由基压力下,SIRT2介导的SMC1磷酸化水平的改变依赖其去乙酰化酶活性 | 第48-49页 |
| 3.6.4 氧自由基压力下,CBP降低SMC1磷酸化水平 | 第49页 |
| 3.6.5 氧自由基压力下,HDAC抑制剂降低SMC1磷酸化水平 | 第49-50页 |
| 3.6.6 SMC1Lys579位点在氧自由基压力下,调节SMC1的磷酸化水平 | 第50-51页 |
| 3.6.7 氧自由基压力下,SMC1磷酸化水平不影响其乙酰化水平 | 第51页 |
| 3.6.8 SIRT2调节ATM与SMC1结合以及ATM活性进而提高SMC1磷酸化 | 第51-54页 |
| 3.7 SMC1的乙酰化活化位点K579Q促进HCT116细胞周期G_2/M期阻滞 | 第54-55页 |
| 3.8 SMC1的乙酰化活化位点K579Q促进HCT116细胞凋亡 | 第55-56页 |
| 3.9 SMC1的乙酰化位点K579Q活化突变能抑制裸鼠肿瘤的形成 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 本研究创新性自我评价 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 综述 | 第69-79页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 个人简介 | 第80页 |
