| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-29页 |
| 1.1 褐藻胶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 褐藻胶 | 第12-13页 |
| 1.1.2 褐藻胶的理化性质 | 第13页 |
| 1.1.3 褐藻胶及其衍生物的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 褐藻胶的降解 | 第14-15页 |
| 1.2.1 化学法降解褐藻胶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 物理法降解褐藻胶 | 第15页 |
| 1.2.3 生物法降解褐藻胶 | 第15页 |
| 1.3 褐藻胶寡糖的研究 | 第15-17页 |
| 1.4 褐藻胶裂解酶 | 第17-26页 |
| 1.4.1 褐藻胶裂解酶的来源 | 第17页 |
| 1.4.2 褐藻胶裂解酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.4.3 褐藻胶裂解酶的分子结构 | 第18-22页 |
| 1.4.4 褐藻胶裂解酶的裂解方式 | 第22-23页 |
| 1.4.5 褐藻胶裂解酶在褐藻酸合成/降解过程中的作用 | 第23页 |
| 1.4.6 褐藻胶裂解酶的应用 | 第23-26页 |
| 1.5 酶的分离与纯化方法 | 第26-27页 |
| 1.6 褐藻胶裂解酶的酶活检测方法 | 第27-28页 |
| 1.6.1 定性分析方法 | 第27页 |
| 1.6.2 定量分析方法 | 第27-28页 |
| 1.7 本文研究的主要内容 | 第28-29页 |
| 第二章 产褐藻胶裂解酶菌株的鉴定 | 第29-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 主要的试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 菌株的活化 | 第29页 |
| 2.1.3 细菌基因组的提取 | 第29页 |
| 2.1.4 16 SrDNA序列的测定及系统进化树的构建 | 第29-30页 |
| 2.1.5 基因组序列分析 | 第30页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第30-31页 |
| 2.2.1 菌株16SrDNA基因克隆及系统进化树的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2 Vibriosp.QD-5的基因组序列分析 | 第31页 |
| 2.3 小结 | 第31-33页 |
| 第三章 褐藻胶裂解酶基因aly-II和aly-IV的克隆和基因序列分析 | 第33-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第33页 |
| 3.1.2 菌种、质粒和引物 | 第33-34页 |
| 3.1.3 褐藻胶裂解酶基因的克隆 | 第34-36页 |
| 3.1.4 目的基因与质粒的连接 | 第36页 |
| 3.1.5 转化 | 第36页 |
| 3.1.6 褐藻胶裂解酶基因序列的测定与序列分析 | 第36页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第36-53页 |
| 3.2.1 褐藻胶裂解酶的克隆 | 第36-37页 |
| 3.2.2 褐藻胶裂解酶Aly-II的序列分析 | 第37-44页 |
| 3.2.3 褐藻胶裂解酶Aly-IV的序列分析 | 第44-53页 |
| 3.3 小结 | 第53-55页 |
| 第四章 重组大肠感菌BL21(DE3)/pET22b(+)-aly-IV的构建、发酵和诱导条件优化 | 第55-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-59页 |
| 4.1.1 菌株、培养基和试剂 | 第55页 |
| 4.1.2 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第55页 |
| 4.1.3 质粒的扩增 | 第55-56页 |
| 4.1.4 转化 | 第56页 |
| 4.1.5 PCR检测阳性克隆 | 第56页 |
| 4.1.6 重组蛋白在大肠杆菌中诱导表达及鉴定 | 第56页 |
| 4.1.7 重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET22b(+)-aly-IV发酵条件优化 | 第56-58页 |
| 4.1.8 重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET22b(+)-aly-IV诱导条件优化 | 第58-59页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第59-70页 |
| 4.2.1 阳性克隆检测结果 | 第59页 |
| 4.2.2 重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第59-60页 |
| 4.2.3 重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET22b(+)-aly-IV发酵条件优化 | 第60-65页 |
| 4.2.4 重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET22b(+)-aly-IV诱导条件优化 | 第65-70页 |
| 4.3 小结 | 第70-72页 |
| 第五章 褐藻胶裂解酶Aly-IV的分离与纯化和酶学性质研究 | 第72-84页 |
| 5.1 材料与方法 | 第72-77页 |
| 5.1.1 菌株、培养基和试剂 | 第72-73页 |
| 5.1.2 蛋白含量标准曲线的绘制： | 第73-74页 |
| 5.1.3 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第74页 |
| 5.1.4 重组褐藻胶裂解酶Aly-IV的过量表达 | 第74页 |
| 5.1.5 包涵体的处理 | 第74-75页 |
| 5.1.6 重组褐藻胶裂解酶的纯化 | 第75页 |
| 5.1.7 褐藻胶裂解酶活力检测 | 第75-76页 |
| 5.1.8 重组褐藻胶裂解酶的酶学性质研究 | 第76-77页 |
| 5.1.9 褐藻胶裂解酶降解性质的研究 | 第77页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第77-83页 |
| 5.2.1 褐藻胶裂解酶Aly-IV的分离纯化 | 第77页 |
| 5.2.2 温度对酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 5.2.3 pH对酶活性的影响 | 第78-79页 |
| 5.2.4 褐藻胶裂解酶Aly-IV对NaCl的依懒性 | 第79-80页 |
| 5.2.5 金属离子对酶活性的影响 | 第80-81页 |
| 5.2.6 酶的底物特异性和动力学参数的测定 | 第81页 |
| 5.2.7 褐藻胶裂解酶Aly-IV降解产物的分析 | 第81-82页 |
| 5.2.8 褐藻酸钠黏度的变化 | 第82-83页 |
| 5.3 小结 | 第83-84页 |
| 第六章 总结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 硕士期间研究成果 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 论文创新点 | 第101页 |
