| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-47页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·背景知识介绍 | 第12-25页 |
| ·嗜盐菌菌株 | 第12-15页 |
| ·视黄醛膜蛋白质结构与功能 | 第15-20页 |
| ·BR和AR4的结构 | 第15-18页 |
| ·BR和AR4的功能 | 第18-20页 |
| ·基因工程技术 | 第20-25页 |
| I.2.3.1 基因工程的基本定义 | 第21页 |
| ·基因工程基本原理 | 第21-22页 |
| ·基因工程的发展 | 第22-23页 |
| ·基因工程基本操作技术 | 第23-25页 |
| ·研究进展 | 第25-38页 |
| ·膜蛋白的质子泵机理和光循环特性 | 第25-32页 |
| ·BR的质子泵机理和光循环特性 | 第25-30页 |
| ·AR4的质子泵机理和光循环特性 | 第30-32页 |
| ·BR的技术应用 | 第32-38页 |
| ·光色应用 | 第32-36页 |
| ·光电应用 | 第36-38页 |
| ·本学位论文的研究思路 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 第二章 Lys41和Asp102突变对细菌视紫红质(BR)功能的影响 | 第47-84页 |
| ·前言 | 第47-50页 |
| ·材料和方法 | 第50-53页 |
| ·野生BR-R_1M_1和AR4-xz515的获取 | 第50页 |
| ·基因工程突变体的制备 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·质谱检测 | 第52页 |
| ·圆二色谱检测 | 第52页 |
| ·吸收光谱检测 | 第52页 |
| ·光诱导的光循环中间体和质子泵行为 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-75页 |
| ·突变体蛋白质的鉴定 | 第53-64页 |
| ·突变体基因序列鉴定 | 第53-59页 |
| ·突变体蛋白质质谱鉴定 | 第59-60页 |
| ·突变体蛋白质圆二色谱测量 | 第60-61页 |
| ·突变体蛋白质可见光谱吸收测量 | 第61-62页 |
| ·突变体蛋白质暗适应转化速率测量 | 第62-64页 |
| ·光诱导质子泵及M态的形成与衰减 | 第64-67页 |
| ·M态衰减的pH依赖性 | 第67-69页 |
| ·O态形成与衰减的pH依赖性 | 第69-73页 |
| ·O态时质子释放基团的pK_a值 | 第73-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 第三章 基因工程突变体BR-D96V与合成聚合物的复合材料 | 第84-98页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·材料和方法 | 第85-88页 |
| ·野生BR和突变体D96N的获取 | 第85页 |
| ·基因工程突变体D96V的制备 | 第85-86页 |
| ·D96V/PVA复合功能膜的制备 | 第86-87页 |
| ·质谱检测 | 第87页 |
| ·膜蛋白吸收光谱与暗适应速率的测定 | 第87页 |
| ·膜蛋白光循环和质子泵的测定 | 第87-88页 |
| ·结果 | 第88-92页 |
| ·D96V的分离鉴定 | 第88页 |
| ·D96V蛋白在溶液中的光学响应 | 第88-90页 |
| ·D96V/PVA复合膜的制备及其光学响应 | 第90-91页 |
| ·D96V/PVA复合膜在干态和湿态的M中间体寿命的比较 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 第四章 细菌视紫红质紫膜抗细胞黏附功能的发现 | 第98-114页 |
| ·前言 | 第98-99页 |
| ·材料与方法 | 第99-102页 |
| ·试剂和设备 | 第99-101页 |
| ·紫膜涂层的制备 | 第101页 |
| ·细胞培养 | 第101-102页 |
| ·细胞活力检测 | 第102页 |
| ·结果与讨论 | 第102-108页 |
| ·紫膜抗MC3T3-E1细胞黏附 | 第102-105页 |
| ·紫膜抗NIH3T3细胞黏附 | 第105-107页 |
| ·紫膜长时间抗细胞黏附 | 第107-108页 |
| ·讨论 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第五章 具有细胞黏附反差的紫膜微阵列的制备 | 第114-131页 |
| ·前言 | 第114-116页 |
| ·实验与结果 | 第116-126页 |
| ·蛋白质微阵列设计 | 第116-119页 |
| ·实验试剂 | 第119-120页 |
| ·突变体D36C的制备 | 第120-124页 |
| ·基因工程引入点突变 | 第120页 |
| ·突变蛋白质的提取及生物活性测定 | 第120-121页 |
| ·金电极微阵列制备 | 第121-123页 |
| ·蛋白质膜制备 | 第123-124页 |
| ·光响应检测 | 第124-125页 |
| ·图案化紫膜对细胞黏附的调控 | 第125-126页 |
| ·本章小结 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-131页 |
| 第六章 大肠杆菌及嗜盐菌表达体系生产古紫质4蛋白的尝试 | 第131-148页 |
| ·前言 | 第131-133页 |
| ·材料与方法 | 第133-138页 |
| ·实验试剂 | 第133页 |
| ·基因工程原理 | 第133-134页 |
| ·大肠杆菌表达古紫质4 | 第134-138页 |
| ·pKS-ar4克隆质粒的构建 | 第134-135页 |
| ·pET-28a-ar4表达质粒的构建 | 第135-136页 |
| ·pET-28a-ar4表达菌株BL21(DE3)中表达 | 第136-137页 |
| ·大肠杆菌裂解及AR4蛋白质的纯化 | 第137页 |
| ·小鼠抗AR4蛋白抗体制备 | 第137页 |
| ·光诱导AR4蛋白质光循环和质子泵行为检测 | 第137-138页 |
| ·嗜盐菌L33表达古紫质4 | 第138页 |
| ·pXLNov-r-mini-ar4表达质粒的构建 | 第138页 |
| ·结果 | 第138-142页 |
| ·大肠杆菌表达AR4蛋白质 | 第138-140页 |
| ·Western blotting检测AR4蛋白质表达 | 第140-141页 |
| ·AR4光循环和质子泵行为 | 第141-142页 |
| ·讨论 | 第142-145页 |
| ·大肠杆菌表达的AR4优缺点 | 第142页 |
| ·嗜盐菌L33表达AR4的尝试 | 第142-145页 |
| ·古紫质ar4基因启动子筛选 | 第143-144页 |
| ·古紫质ar4基因SD序列优化 | 第144页 |
| ·古紫质ar4基因信号肽序列优化 | 第144-145页 |
| ·本章小结 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-148页 |
| 第七章 总结与展望 | 第148-151页 |
| ·本论文的主要结论 | 第148-149页 |
| ·本论文的创新之处 | 第149页 |
| ·本论文的理论和实际意义 | 第149-150页 |
| ·本论文的不足之处和展望 | 第150-151页 |
| 附录一 嗜盐菌的培养和膜蛋白的分离提取 | 第151-156页 |
| 附录二 动力学光谱仪工作原理 | 第156-159页 |
| 附录三 BR和AR4的氨基酸序列及二十种氨基酸分类表 | 第159-166页 |
| 附录四 基因工程克隆载体pKS和表达载体pET-28b质粒谱图 | 第166-168页 |
| 附录五 限制性内切酶酶切位点保护碱基 | 第168-169页 |
| 附录六 各类盐溶液的饱和蒸汽压和相对湿度 | 第169-170页 |
| 作者简历和论文 | 第170-173页 |
| 致谢 | 第173-175页 |
