| 英文缩略词表 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-32页 |
| 1.1 干扰素概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 干扰素的来源和分类 | 第15-17页 |
| 1.1.2 干扰素的性质和生物学特性 | 第17-18页 |
| 1.2 干扰素的生物功能和作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3 干扰素发挥作用的信号转导通路 | 第19页 |
| 1.4 干扰素在临床兽医中的应用 | 第19-21页 |
| 1.5 干扰素受体的概述 | 第21-23页 |
| 1.5.1 干扰素受体的分类及作用 | 第21页 |
| 1.5.2 Ⅰ型干扰素受体的结构 | 第21-22页 |
| 1.5.3 Ⅱ 型干扰素受体的结构 | 第22-23页 |
| 1.6 干扰素受体的信号传导 | 第23-26页 |
| 1.6.1 干扰素受体的信号传导途径 | 第23-24页 |
| 1.6.2 干扰素受体的第二信使 | 第24-26页 |
| 1.7 实时荧光定量 PCR | 第26-30页 |
| 1.7.1 实时荧光定量 PCR 的分类 | 第26-28页 |
| 1.7.2 实时荧光定量 PCR 的定量方法 | 第28页 |
| 1.7.3 实时荧光定量 PCR 的应用 | 第28-29页 |
| 1.7.4 荧光定量 PCR 的优点 | 第29-30页 |
| 1.8 绿色荧光蛋白 | 第30页 |
| 1.9 研究的目的与意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-59页 |
| 2.1 材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 病毒、细胞及干扰素 | 第32页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第32页 |
| 2.1.3 质粒及受体菌 | 第32-34页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第34页 |
| 2.1.5 试验所用溶液及其配制 | 第34-36页 |
| 2.2 试验方法 | 第36-59页 |
| 2.2.1 标准阳性质粒的制备 | 第36-43页 |
| 2.2.1.1 设计引物 | 第36-37页 |
| 2.2.1.2 IFNAR-1 基因 RNA 的提取 | 第37页 |
| 2.2.1.3 IFNAR-1 基因部分片段的 RT-PCR 扩增 | 第37-39页 |
| 2.2.1.4 IFNAR-1 基因部分片段 PCR 产物的纯化回收 | 第39页 |
| 2.2.1.5 目的基因的连接转化及鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.1.5.1 目的基因与 pMD18-T 载体的连接体系 | 第39-40页 |
| 2.2.1.5.2 大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.1.5.3 连接产物转化 | 第41页 |
| 2.2.1.6 重组质粒 DNA 的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.1.7 重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| 2.2.1.8 阳性克隆序列的测序 | 第42-43页 |
| 2.2.2 内参基因质粒标准品的制备 | 第43页 |
| 2.2.3 SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 的建立 | 第43-45页 |
| 2.2.3.1 质粒标准品原始定量 | 第43-44页 |
| 2.2.3.2 荧光定量 PCR 反应条件的优化 | 第44页 |
| 2.2.3.3 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 的反应体系及程序 | 第44-45页 |
| 2.2.3.4 标准曲线的建立 | 第45页 |
| 2.2.4 临床样品检测 | 第45-47页 |
| 2.2.4.1 组织样本的采集 | 第45页 |
| 2.2.4.2 临床样品组织中 RNA 的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.4.3 反转录反应 | 第46页 |
| 2.2.4.4 实时荧光定量 PCR 检测不同器官的 IFNAR-1 的拷贝量 | 第46-47页 |
| 2.2.5 蛋白吸附实验 | 第47-59页 |
| 2.2.5.1 鸡 IFN-β基因的克隆 | 第47-49页 |
| 2.2.5.1.1 引物设计 | 第47页 |
| 2.2.5.1.2 鸡 IFN-β基因组织 RNA 的提取 | 第47页 |
| 2.2.5.1.3 IFNβ基因部分片段的 RT-PCR 扩增 | 第47-49页 |
| 2.2.5.1.4 IFN-β基因部分片段 PCR 产物的纯化回收 | 第49页 |
| 2.2.5.2 构建 pMD-IFN-β载体 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2.1 目的基因与 pMD18-T 的连接 | 第49页 |
| 2.2.5.2.2 连接产物转化 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2.3 重组质粒 DNA 的提取 | 第50页 |
| 2.2.5.2.4 重组质粒的鉴定 | 第50页 |
| 2.2.5.2.5 阳性克隆序列的测序 | 第50页 |
| 2.2.5.3 构建 pEGFP-N1- IFN-β载体 | 第50-52页 |
| 2.2.5.3.1 酶切 pMD-IFN-β和 pEGFP-N1 空载体 | 第50页 |
| 2.2.5.3.2 连接 | 第50-51页 |
| 2.2.5.3.3 连接产物转化 | 第51页 |
| 2.2.5.3.4 阳性克隆的鉴定 | 第51页 |
| 2.2.5.3.5 阳性克隆序列测序 | 第51-52页 |
| 2.2.5.4 PCR 扩增 IFN-β+GFP 融合基因 | 第52页 |
| 2.2.5.5 构建 pcDNA3.1-N1-IFN-β+GFP 载体 | 第52-53页 |
| 2.2.5.5.1 PCR 产物的纯化回收 | 第52页 |
| 2.2.5.5.2 融合基因 IFN-β+GFP 与 pcDNA3.1-N1 载体的连接 | 第52-53页 |
| 2.2.5.5.3 连接产物转化 | 第53页 |
| 2.2.5.5.4 阳性克隆的鉴定 | 第53页 |
| 2.2.5.5.5 阳性克隆序列测序 | 第53页 |
| 2.2.5.6 重组质粒 pcDNA3.1-N1-IFN-β+GFP 的提取 | 第53-54页 |
| 2.2.5.7 293T 细胞的制备 | 第54页 |
| 2.2.5.8 IFN-β+GFP 融合基因的真核表达 | 第54-55页 |
| 2.2.5.8.1 真核表达载体的转染 | 第54-55页 |
| 2.2.5.8.2 倒置荧光显微镜检测重组 IFN-β+GFP 蛋白的瞬时表达 | 第55页 |
| 2.2.5.9 镍柱纯化融合蛋白 | 第55页 |
| 2.2.5.10 表达的重组 IFN-β+GFP 蛋白的 Western blot 鉴定 | 第55-56页 |
| 2.2.5.11 合蛋白的除盐、浓度测定 | 第56-58页 |
| 2.2.5.12 切片的制备 | 第58-59页 |
| 2.2.5.13 融合蛋白 IFN-β+GFP 浸润切片显色 | 第59页 |
| 2.2.6 口服干扰素及干扰素抗病毒活性的检测 | 第59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-72页 |
| 3.1 反转录或得 IFNAR-1 部分基因 | 第59-60页 |
| 3.2 pMD-IFNAR-1 和 pMD-β-actin 质粒的 PCR 鉴定 | 第60页 |
| 3.3 荧光定量 PCR 反应条件的优化 | 第60-61页 |
| 3.4 荧光定量 PCR 检测 IFNAR-1、β-actin 基因标准曲线的建立 | 第61-62页 |
| 3.5 临床样品的检测结果 | 第62-66页 |
| 3.6 反转录或得 IFN-β基因 | 第66页 |
| 3.7 pEGFP-N1- IFN-β质粒的双酶切鉴定 | 第66-67页 |
| 3.8 PCR 扩增 IFN-β和 GFP 融合基因 | 第67页 |
| 3.9 pcDNA3.1-N1- IFN-β-GFP 载体的双酶切鉴定 | 第67-68页 |
| 3.10 倒置荧光显微镜检测重组 IFN-β+GFP 蛋白的瞬时表达 | 第68-69页 |
| 3.11 Western -Blot 检测 IFN-β+GFP 融合蛋白 | 第69页 |
| 3.12 考马斯亮蓝法测定重组蛋白的浓度 | 第69-71页 |
| 3.12.1 标准曲线的绘制 | 第69-70页 |
| 3.12.2 蛋白质待测样品液测定结果 | 第70-71页 |
| 3.13 融合蛋白 IFN-β-GFP 浸润切片显色 | 第71页 |
| 3.14 口服干扰素及干扰素抗病毒活性的检测 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
