| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文对照及英文缩写词表 | 第10-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| 1.1 糖尿病的分类 | 第15-17页 |
| 1.1.1 1型糖尿病 | 第15-16页 |
| 1.1.2 2型糖尿病 | 第16页 |
| 1.1.3 特殊类型糖尿病 | 第16-17页 |
| 1.1.4 妊娠型糖尿病 | 第17页 |
| 1.2 糖尿病的分子机制研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1.1 型糖尿病的分子机制 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 型糖尿病的分子机制 | 第18-20页 |
| 1.3 糖脂毒性研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 糖脂毒性影响胰岛β细胞凋亡的机制研究 | 第21-22页 |
| 1.3.2 糖脂毒性对胰岛β细胞GSIS功能损伤的机制研究 | 第22-23页 |
| 1.3.3 糖脂毒性的系统生物学研究 | 第23页 |
| 1.4 胰岛素的合成与分泌研究进展 | 第23-26页 |
| 1.5 DDX家族蛋白及DDX1的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.6 mRNA的可变剪切 | 第27-29页 |
| 1.7 系统生物学 | 第29-30页 |
| 1.8 本论文立题依据、研究内容及意义 | 第30-32页 |
| 第二章 以INS1细胞为模型系统研究脂毒性和糖脂毒性对胰岛β细胞功能的影响 | 第32-63页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-45页 |
| 2.1.1 细胞培养及糖脂毒性模型的建立 | 第33-34页 |
| 2.1.2 增殖检测 | 第34页 |
| 2.1.3 凋亡检测 | 第34页 |
| 2.1.4 ELISA检测胰岛素含量 | 第34-35页 |
| 2.1.5 MAPS-seq | 第35-38页 |
| 2.1.6 蛋白质组样品制备及检测 | 第38-39页 |
| 2.1.7 qRT-PCR | 第39-42页 |
| 2.1.8 Western-blot | 第42页 |
| 2.1.9 生物信息学分析转录组和蛋白组 | 第42-43页 |
| 2.1.10 Far1和Setd8高表达细胞系的构建 | 第43页 |
| 2.1.11 利用Crisper/Cas9体系构建Pkcδ敲除细胞系 | 第43-44页 |
| 2.1.12 统计学分析 | 第44-45页 |
| 2.2 实验结果 | 第45-60页 |
| 2.2.1 高脂和高糖高脂处理对INS1细胞表型的影响 | 第45-47页 |
| 2.2.2 转录组和蛋白质组结果 | 第47-48页 |
| 2.2.3 qRT-PCR结果 | 第48页 |
| 2.2.4 生物信息学分析转录组和蛋白质组 | 第48-50页 |
| 2.2.5 内质网应激通路变化 | 第50-51页 |
| 2.2.6 脂代谢 | 第51-52页 |
| 2.2.7 Far1高表达促进高脂导致的内质网应激 | 第52-53页 |
| 2.2.8 Pkcδ敲除抑制脂毒性 | 第53-56页 |
| 2.2.9 SETD8对胰岛β细胞增殖的影响 | 第56-58页 |
| 2.2.10 糖脂毒性与脂毒性的比较 | 第58-59页 |
| 2.2.11 分泌囊泡相关基因的变化 | 第59-60页 |
| 2.3 讨论 | 第60-61页 |
| 2.4 本章结论 | 第61-63页 |
| 第三章 DDX1介导高脂抑制胰岛素的翻译 | 第63-87页 |
| 3.1 材料与方法 | 第63-68页 |
| 3.1.1 细胞培养 | 第63页 |
| 3.1.2 ChIRP | 第63-65页 |
| 3.1.3 银染 | 第65页 |
| 3.1.4 免疫共沉淀 | 第65页 |
| 3.1.5 DDX1低表达和高表达稳定细胞系的构建 | 第65-66页 |
| 3.1.6 模拟磷酸化突变的DDX1高表达细胞系的构建 | 第66页 |
| 3.1.7 ELISA检测胰岛素 | 第66页 |
| 3.1.8 Clip-seq | 第66-67页 |
| 3.1.9 新翻译蛋白检测 | 第67页 |
| 3.1.10 免疫荧光 | 第67-68页 |
| 3.1.11 高脂喂养及小鼠胰岛分离 | 第68页 |
| 3.1.12 统计学分析 | 第68页 |
| 3.2 实验结果 | 第68-84页 |
| 3.2.1 高脂处理抑制胰岛素的翻译 | 第68-70页 |
| 3.2.2 胰岛素mRNA结合蛋白DDX1的鉴定和验证 | 第70-71页 |
| 3.2.3 低表达和过表达DDX1对胰岛素翻译的影响 | 第71-73页 |
| 3.2.4 DDX1介导高脂抑制胰岛素翻译 | 第73-74页 |
| 3.2.5 高脂促进DDX1与胰岛素mRNA分子的解离及入核 | 第74-77页 |
| 3.2.6 高脂导致DDX1磷酸化抑制胰岛素翻译 | 第77-78页 |
| 3.2.7 DDX1相互作用蛋白的鉴定 | 第78-79页 |
| 3.2.8 Clip-seq鉴定DDX1相互作用的RNA分子种类与RNA结合位点 | 第79-83页 |
| 3.2.9 高脂喂养抑制小鼠胰岛β细胞胰岛素的翻译 | 第83-84页 |
| 3.3 讨论 | 第84-85页 |
| 3.4 本章结论 | 第85-87页 |
| 第四章 DDX1对全基因组mRNA的可变剪接及表达量的影响 | 第87-96页 |
| 4.1 材料和方法 | 第87-88页 |
| 4.1.1 RNA-seq建库及测序 | 第87页 |
| 4.1.2 差异基因分析 | 第87-88页 |
| 4.1.3 可变剪接分析 | 第88页 |
| 4.1.4 ELISA检测胰岛素分泌 | 第88页 |
| 4.1.5 统计学分析 | 第88页 |
| 4.2 结果 | 第88-94页 |
| 4.2.1 DDX1对全基因组基因表达量的影响 | 第88-89页 |
| 4.2.2 DDX1选择性地调节基因表达 | 第89-91页 |
| 4.2.3 DDX1对全基因组mRNA可变剪接的影响 | 第91-92页 |
| 4.2.4 DDX1影响mRNA可变剪接机制的初步研究 | 第92-93页 |
| 4.2.5 DDX1对胰岛β细胞功能的影响 | 第93-94页 |
| 4.3 讨论 | 第94页 |
| 4.4 本章结论 | 第94-96页 |
| 全文总结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 博士期间学术成果 | 第114-115页 |
