| 论文创新点 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第16-36页 |
| 1 HBV的研究概况 | 第16-26页 |
| 1.1 HBV病毒以及在体内外的感染 | 第16-18页 |
| 1.1.1 HBV的结构与组成 | 第16页 |
| 1.1.2 HBV传播模式和宿主范围 | 第16-17页 |
| 1.1.3 HBV的体内外感染 | 第17-18页 |
| 1.2 HBV复制周期 | 第18-24页 |
| 1.2.1 吸附和进入 | 第18-19页 |
| 1.2.2 松弛环状DNA的入核 | 第19页 |
| 1.2.3 共价闭合环状DNA的形成和维持 | 第19-21页 |
| 1.2.4 病毒RNA复制 | 第21-23页 |
| 1.2.5 病毒子代DNA合成 | 第23-24页 |
| 1.3 乙型肝炎的治疗与研究 | 第24-26页 |
| 2 MAPK-HNF4α通路与与HBV复制的相互关系 | 第26-30页 |
| 2.1 MAPK-ERK通路 | 第27-28页 |
| 2.2 MAPK-JNK通路 | 第28页 |
| 2.3 MAPK-p38通路 | 第28-29页 |
| 2.4 MAPK-HNF4α通路与HBV复制的关系 | 第29-30页 |
| 3 阳离子宿主防御肽抗病毒研究概况 | 第30-35页 |
| 4 本工作出发点 | 第35-36页 |
| 第二章 抗HBV多肽Mucroporin-M1的筛选 | 第36-43页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-39页 |
| 2.2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第36-38页 |
| 2.2.1.1 细胞系 | 第36-37页 |
| 2.2.1.2 细胞培养基以及相关溶液配制 | 第37页 |
| 2.2.1.3 蝎毒素多肽的合成 | 第37页 |
| 2.2.1.4 Elisa试剂盒 | 第37-38页 |
| 2.2.1.5 实验仪器 | 第38页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.2.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.2.2 多肽抑制HBV活性筛选 | 第38-39页 |
| 2.2.2.3 多肽序列分析 | 第39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-42页 |
| 2.3.1 Mucroporin-M1以及其他多肽的分离鉴定 | 第39-41页 |
| 2.3.2 抗HBV多肽Mucroporin-M1的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 Mucroporin-M1多肽体外抑制HBV的复制 | 第43-67页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-59页 |
| 3.2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 3.2.1.1 细胞系 | 第44页 |
| 3.2.1.2 质粒 | 第44页 |
| 3.2.1.3 抗体 | 第44页 |
| 3.2.1.4 试剂和试剂盒 | 第44-45页 |
| 3.2.1.5 实验仪器 | 第45页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第45-59页 |
| 3.2.2.1 大肠杆菌感受态制备 | 第45页 |
| 3.2.2.2 细胞毒性检测 | 第45-46页 |
| 3.2.2.3 细胞上清HBeAg和HBsAg检测 | 第46-47页 |
| 3.2.2.4 细胞上清中的HBV DNA检测 | 第47-48页 |
| 3.2.2.5 Western blot检测HBV Core蛋白 | 第48-50页 |
| 3.2.2.6 Northern blot 检测 HBV RNA | 第50-56页 |
| 3.2.2.7 Southern blot 检测 HBV DNA | 第56-59页 |
| 3.3 实验结果 | 第59-65页 |
| 3.3.1 Mucroporin-M1对细胞生长的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.2 Mucroporin-M1对细胞上清中病毒的抑制效应 | 第60-62页 |
| 3.3.2.1 Mucroporin-M1对细胞上清中HBeAg和HBsAg的抑制效应 | 第60-61页 |
| 3.3.2.2 Mucroporin-M1对细胞上清中HBV DNA的抑制效应 | 第61-62页 |
| 3.3.3 Mucroporin-M1对细胞内HBV病毒的抑制 | 第62-65页 |
| 3.3.3.1 Mucroporin-M1抑制细胞内HBV Core蛋白的表达 | 第62-63页 |
| 3.3.3.2 Mucroporin-M1对细胞内HBV DNA的浓度依赖抑制效应 | 第63-64页 |
| 3.3.3.3 Mucroporin-M1抑制细胞内HBV RNA的表达 | 第64-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 Mucroporin-M1多肽抑制小鼠体内HBV的复制 | 第67-74页 |
| 4.1 引言 | 第67页 |
| 4.2 材料与方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第67-68页 |
| 4.2.1.1 实验动物 | 第67页 |
| 4.2.1.2 实验试剂和材料 | 第67-68页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 4.2.2.1 BALB/c小鼠急性HBV感染模型构建及多肽处理 | 第68页 |
| 4.2.2.2 小鼠血液中HBeAg和HBsAg抗原检测 | 第68-69页 |
| 4.2.2.3 组织切片和免疫组化 | 第69页 |
| 4.3 实验结果 | 第69-72页 |
| 4.3.1 Mucroporin-M1多肽对小鼠血清中HBeAg和HBsAg的抑制 | 第69-71页 |
| 4.3.2 Mucroporin-M1多肽抑制小鼠肝细胞中HBcAg的表达 | 第71-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 Mucroporin-M1体外抑制HBV复制的作用机制 | 第74-97页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 材料与方法 | 第74-85页 |
| 5.2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第74-77页 |
| 5.2.1.1 质粒 | 第74-76页 |
| 5.2.1.2 试剂 | 第76页 |
| 5.2.1.3 试剂盒 | 第76页 |
| 5.2.1.4 实验仪器 | 第76-77页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第77-85页 |
| 5.2.2.1 细胞总RNA的提取 | 第77页 |
| 5.2.2.2 cDNA一链的反转录合成 | 第77页 |
| 5.2.2.3 实时定量PCR | 第77-79页 |
| 5.2.2.4 超纯质粒的提取 | 第79页 |
| 5.2.2.5 双荧光素酶实验 | 第79-81页 |
| 5.2.2.6 凝胶阻滞实验 | 第81-84页 |
| 5.2.2.7 Western blot检测HNF4α | 第84-85页 |
| 5.2.2.8 细胞MAPK通路的检测 | 第85页 |
| 5.2.2.9 MAPK抑制剂对HBV DNA影响的检测 | 第85页 |
| 5.3 实验结果 | 第85-94页 |
| 5.3.1 Mucroprin-M1多肽抑制HBV病毒启动子转录活性 | 第85-87页 |
| 5.3.2 Mucroprin-M1对反式转录因子结合HBV启动子顺式元件的影响 | 第87-89页 |
| 5.3.3 Mucroprin-M1抑制HNF4α的表达 | 第89-90页 |
| 5.3.4 Mucroprin-M1对MAPK通路的激活作用 | 第90-92页 |
| 5.3.5 MAPK通路抑制剂对Mucropr in-M1激活MAPK通路作用的阻断 | 第92-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-97页 |
| 第六章 Mucroporin-M1抑制小鼠体内HBV复制的作用机制 | 第97-102页 |
| 6.1 引言 | 第97页 |
| 6.2 材料与方法 | 第97-99页 |
| 6.2.1 实验材料,试剂和仪器 | 第97-98页 |
| 6.2.1.1 实验动物 | 第97-98页 |
| 6.2.1.2 实验试剂和材料 | 第98页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第98-99页 |
| 6.2.2.1 BALB/c小鼠急性HBV感染模型构建及多肽处理 | 第98页 |
| 6.2.2.2 小鼠肝脏细胞蛋白提取和制样 | 第98-99页 |
| 6.2.2.3 Western blot检测MAPK蛋白和HBV Core蛋白 | 第99页 |
| 6.3 实验结果 | 第99-100页 |
| 6.4 讨论 | 第100-102页 |
| 实验总结与展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-113页 |
| 博士期间发表论文以及获得专利 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
