| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 一 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 茯苓概述 | 第12-13页 |
| 2 茯苓化学成分概述 | 第13-14页 |
| 2.1 多糖类化合物 | 第13页 |
| 2.2 萜类化合物 | 第13-14页 |
| 2.3 甾体类化合物 | 第14页 |
| 2.4 蛋白质类化合物 | 第14页 |
| 2.5 其他成分 | 第14页 |
| 3 茯苓药理作用概述 | 第14-18页 |
| 3.1 免疫调节作用 | 第14-15页 |
| 3.2 抗肿瘤作用 | 第15-16页 |
| 3.3 对消化系统作用 | 第16页 |
| 3.3.1 对肝脏的作用 | 第16页 |
| 3.3.2 对胃的作用 | 第16页 |
| 3.3.3 对肠道的作用 | 第16页 |
| 3.4 利尿作用 | 第16-17页 |
| 3.5 抗氧化抗衰老作用 | 第17页 |
| 3.5.1 抗氧化作用 | 第17页 |
| 3.5.2 抗衰老作用 | 第17页 |
| 3.6 抗病毒消炎作用 | 第17-18页 |
| 3.6.1 抗病毒作用 | 第17-18页 |
| 3.6.2 消炎作用 | 第18页 |
| 3.7 抗排斥作用 | 第18页 |
| 3.8 其他作用 | 第18页 |
| 4 茯苓酸生物合成途径探索 | 第18-19页 |
| 5 转录组测序概述 | 第19-22页 |
| 5.1 抑制消减杂交技术 | 第19页 |
| 5.2 基因芯片技术 | 第19-20页 |
| 5.3 EST文库筛选技术 | 第20页 |
| 5.4 高通量测序技术 | 第20-22页 |
| 5.4.1 第二代高通量技术简介 | 第20页 |
| 5.4.2 高通量转录组测序的方法和步骤 | 第20-22页 |
| 6 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 6.1 研究目的 | 第22页 |
| 6.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 二 材料与方法 | 第23-34页 |
| 1 试验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 生物材料 | 第23页 |
| 1.2 试验试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.1 化学试剂 | 第23页 |
| 1.2.2 分子试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 试验仪器设备及耗材 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-34页 |
| 2.1 茯苓菌核样品制备及茯苓菌丝培养 | 第24页 |
| 2.1.1 茯苓菌核样品的制备方法 | 第24页 |
| 2.1.2 茯苓菌丝培养 | 第24页 |
| 2.2 RNA提取及mRNA纯化 | 第24-26页 |
| 2.2.1 样品的研磨和匀浆 | 第24-25页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.3 RNA沉淀的清洗 | 第25页 |
| 2.2.4 RNA溶解 | 第25页 |
| 2.2.5 mRNA的纯化 | 第25-26页 |
| 2.3 转录组测序 | 第26-31页 |
| 2.3.1 产量统计 | 第27页 |
| 2.3.2 组装结果 | 第27页 |
| 2.3.3 Unigene功能注释 | 第27页 |
| 2.3.4 Unigene GO分类 | 第27-28页 |
| 2.3.5 Unigene代谢通路分析 | 第28页 |
| 2.3.6 预测编码蛋白框(CDS) | 第28-29页 |
| 2.3.7 Unigene表达差异分析 | 第29-30页 |
| 2.3.8 差异基因的GO分析 | 第30-31页 |
| 2.4 总三萜及茯苓酸含量测定 | 第31-32页 |
| 2.4.1 总三萜含量测定方法 | 第31页 |
| 2.4.2 茯苓酸含量测定方法 | 第31-32页 |
| 2.5 Realtime RT-PCR检测 | 第32-34页 |
| 2.5.1 反应体系 | 第32页 |
| 2.5.2 反应条件 | 第32-34页 |
| 三 结果分析与讨论 | 第34-56页 |
| 1 RNA提取结果 | 第34页 |
| 2 转录组测序 | 第34-46页 |
| 2.1 产量统计 | 第34-35页 |
| 2.2 组装 | 第35-39页 |
| 2.3 Unigene功能注释 | 第39-41页 |
| 2.4 Unigene的GO分类 | 第41-42页 |
| 2.5 Unigene代谢通路分析 | 第42-43页 |
| 2.6 预测编码蛋白框 | 第43-45页 |
| 2.7 Unigene表达差异分析 | 第45-46页 |
| 2.8 差异Unigene的GO分析 | 第46页 |
| 3 茯苓酸生物合成途径关键酶及其基因分析 | 第46-49页 |
| 3.1 茯苓酸生物合成途径中的重要中间物及关键酶 | 第47-48页 |
| 3.1.1 茯苓酸生物合成途径中的重要中间物 | 第47页 |
| 3.1.2 茯苓酸生物合成途径中的关键酶 | 第47-48页 |
| 3.2 关键酶基因分析 | 第48-49页 |
| 4 茯苓总三萜和茯苓酸含量的测定 | 第49-52页 |
| 4.1 茯苓总三萜含量测定 | 第49-50页 |
| 4.1.1 标准曲线的建立 | 第49页 |
| 4.1.2 总三萜的含量测定 | 第49-50页 |
| 4.2 茯苓酸含量测定 | 第50-52页 |
| 5 REALTIME PCR检测 | 第52-56页 |
| 5.1 Realtime PCR检测引物 | 第52页 |
| 5.2 内参基因tubulin alpha特异扩增产物的确定 | 第52页 |
| 5.3 菌丝和菌核样品tubulin alpha及待测定基因扩增结果 | 第52-56页 |
| 四 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-76页 |