| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 植物雌性不育的研究进展 | 第13-19页 |
| ·植物雌性不育的特征和类型 | 第13-14页 |
| ·植物雌性不育的外观表现 | 第13页 |
| ·植物雌性不育的类型 | 第13-14页 |
| ·植物雌性不育的产生 | 第14-16页 |
| ·远缘杂交诱发雌性不育 | 第14-15页 |
| ·生长调节物质引起雌性不育 | 第15页 |
| ·生态环境的改变诱发雌性不育 | 第15页 |
| ·自然基因突变产生雌性不育 | 第15-16页 |
| ·生理或遗传因素诱发产生的雌性不育 | 第16页 |
| ·植物雌性不育基因的研究 | 第16-17页 |
| ·植物雌性不育相关蛋白的研究 | 第17页 |
| ·水稻雌性不育研究 | 第17-19页 |
| ·水稻雌性不育的的类型 | 第17-18页 |
| ·水稻雌性不育的产生 | 第18页 |
| ·水稻雌性不育基因的研究与定位 | 第18-19页 |
| 2 农杆菌介导水稻遗传转化与植株再生的研究进展 | 第19-26页 |
| ·水稻组织培养植株再生体系的研究 | 第20-22页 |
| ·基因型(品种)对水稻组织培养植株再生体系的影响 | 第20-21页 |
| ·外植体对水稻组织培养和植株再生体系的影响 | 第21页 |
| ·培养基成分对水稻组织培养和植株再生体系的影响 | 第21-22页 |
| ·农杆菌介导水稻遗传转化体系的研究 | 第22-26页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·农杆菌vir区基因活性的诱导 | 第22-23页 |
| ·愈伤组织的预处理 | 第23页 |
| ·菌液侵染浓度和时间对水稻转化频率的影响 | 第23页 |
| ·农杆菌悬浮浸染对水稻转化频率的影响 | 第23-24页 |
| ·共培养环境和时间对水稻转化频率的影响 | 第24页 |
| ·共培养后农杆菌的抑制 | 第24-25页 |
| ·抗性选择标记 | 第25页 |
| ·抗生素的使用 | 第25-26页 |
| 3 本论文研究的背景、目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第27-37页 |
| 1 材料 | 第27-30页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株和质粒(质粒图谱及其说明见附录Ⅰ) | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·细菌培养基 | 第27页 |
| ·适用于水稻的培养基 | 第27-28页 |
| ·重要试剂及溶液 | 第28-29页 |
| ·常用抗生素、激素及其工作浓度 | 第28-29页 |
| ·重要溶液 | 第29页 |
| ·化学试剂和分子试剂 | 第29页 |
| ·重要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-37页 |
| ·表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·PTB1过量表达载体的构建 | 第30页 |
| ·PTB1互补表达载体的构建 | 第30页 |
| ·PTB1 RNAi表达载体的构建 | 第30页 |
| ·PTB1组织表达载体构建 | 第30-31页 |
| ·PTB1蛋白细胞定位表达载体构建 | 第31页 |
| ·重组质粒的农杆菌转化 | 第31-32页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第31页 |
| ·农杆菌的转化 | 第31页 |
| ·转化子的鉴定和保存 | 第31-32页 |
| ·幼穗愈伤组织的获得 | 第32页 |
| ·外植体的取材 | 第32页 |
| ·幼穗愈伤组织的诱导 | 第32页 |
| ·成熟胚愈伤组织的诱导 | 第32页 |
| ·愈伤组织的预培养 | 第32页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第32-33页 |
| ·农杆菌菌株的活化与扩大培养 | 第32-33页 |
| ·农杆菌侵染与共培养 | 第33页 |
| ·愈伤组织脱菌与抗性愈伤组织的筛选 | 第33页 |
| ·抗性愈伤组织的预分化、分化及幼苗生根与大田移栽 | 第33页 |
| ·水稻转基因植株的分子生物学检测 | 第33-34页 |
| ·水稻转化植株的PCR检测 | 第33-34页 |
| ·水稻转化植株的PCR检测和Basta检测 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化——花序浸渍 | 第34-36页 |
| ·拟南芥无菌培养 | 第34页 |
| ·拟南芥土壤种植 | 第34页 |
| ·农杆菌的培养 | 第34-35页 |
| ·拟南芥的转化 | 第35页 |
| ·转化拟南芥的筛选 | 第35页 |
| ·转化拟南芥的GUS染色 | 第35-36页 |
| ·基因枪轰击洋葱表皮细胞 | 第36-37页 |
| ·材料准备 | 第36页 |
| ·微弹制备(金粉母液制备)(Kikkert,1993) | 第36页 |
| ·基因枪轰击 | 第36页 |
| ·观察 | 第36-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-54页 |
| 1 突变体表型特征和基因定位 | 第37-39页 |
| ·突变体的表型特征 | 第37页 |
| ·PTB1基因的定位与克隆 | 第37-39页 |
| 2 植物表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·PTB1过量表达载体构建 | 第39页 |
| ·PTB1互补表达载体构建 | 第39-41页 |
| ·PTB1基因干扰表达载体构建 | 第41-42页 |
| ·PTB1基因组织表达载体构建 | 第42页 |
| ·PTB1蛋白细胞定位瞬时表达载体构建 | 第42-43页 |
| 3 遗传转化与功能分析 | 第43-54页 |
| ·fs-202R幼穗诱导愈伤组织的获得 | 第43-44页 |
| ·外植体来源与培养基对幼穗愈伤诱导的影响 | 第43-44页 |
| ·幼穗取材长度对愈伤组织诱导的影响 | 第44页 |
| ·灭菌时间对愈伤诱导的影响 | 第44页 |
| ·农杆菌介导的PTB1基因功能互补分析 | 第44-46页 |
| ·转PTB1基因互补水稻植株的获得 | 第44页 |
| ·继代次数对转化和再生的影响 | 第44-46页 |
| ·T_0代转基因植株的检测 | 第46-47页 |
| ·T_1代转基因植株的互补分析 | 第47-49页 |
| ·PTB1基因的组织表达特征 | 第49-50页 |
| ·PTB1蛋白的亚细胞定位 | 第50-51页 |
| ·PTB1基因的过量、干扰表达的初步研究 | 第51-54页 |
| ·转PTB1基因过量表达水稻植株的获得 | 第51页 |
| ·T_0代PTB1基因过量表达植株的检测 | 第51-52页 |
| ·PTB1基因RNAi转基因植株的获得 | 第52-54页 |
| 第四部分 讨论 | 第54-60页 |
| 1 PTB1基因的功能研究 | 第54-56页 |
| 2 籼稻不育材料愈伤组织诱导与农杆菌介导遗传转化的优化 | 第56-60页 |
| ·外植体的优化 | 第56页 |
| ·外植体的取材优化 | 第56-57页 |
| ·愈伤组织的诱导优化 | 第57页 |
| ·愈伤组织的继代优化 | 第57-58页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第58-59页 |
| ·再生能力的优化 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-73页 |
| 附录Ⅰ | 第66-70页 |
| 附录Ⅱ | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73页 |