| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-20页 |
| 1.1 MAPK信号通路简介 | 第15-16页 |
| 1.2 JNK和MKK7简介 | 第16页 |
| 1.3 JNK与肿瘤发生发展的关系 | 第16-17页 |
| 1.4 Neddylation简介 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题研究内容 | 第18-20页 |
| 第一部分 乳腺癌细胞中MKK7 neddylation的鉴定 | 第20-27页 |
| 1. 材料和方法 | 第20-23页 |
| 1.1 细胞株 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第21-22页 |
| 1.5 方法 | 第22-23页 |
| 1.5.1 细胞的培养与冻存 | 第22页 |
| 1.5.2 免疫沉淀 | 第22页 |
| 1.5.3 免疫印迹 | 第22-23页 |
| 2 结果 | 第23-25页 |
| 2.1 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中MKK7 neddylation的检测 | 第23-24页 |
| 2.2 MDA-MB-231稳定过表达GFP-MKK7细胞株中MKK7 neddylation的检测 | 第24-25页 |
| 2.3 乳腺癌细胞系MCF-7中MKK7 neddylation的检测 | 第25页 |
| 3 讨论 | 第25-26页 |
| 4 本章小结 | 第26-27页 |
| 第二部分 乳腺癌细胞中neddylation对MKK7/JNK通路及其它MAPK成员磷酸化的影响及其机制探讨 | 第27-39页 |
| 1 乳腺癌细胞中neddylation对MKK7/JNK通路及其它MAPK成员磷酸化的影响 | 第27-33页 |
| 1.1 材料和方法 | 第27-28页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第28页 |
| 1.1.5 方法 | 第28页 |
| 1.2 结果 | 第28-32页 |
| 1.2.1 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中敲低UBA3或NEDD8对MKK7/JNK磷酸化的影响 | 第28-29页 |
| 1.2.2 乳腺癌细胞系MCF-7中敲低UBA3对MKK7/JNK磷酸化的影响 | 第29-30页 |
| 1.2.3 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中敲低UBA3或NEDD8对p38/ERK磷酸化的影响 | 第30-31页 |
| 1.2.4 乳腺癌细胞系MCF-7中敲低NEDD8对p38/ERK磷酸化的影响 | 第31-32页 |
| 1.3 讨论 | 第32-33页 |
| 2 乳腺癌细胞中neddylation影响JNK本底磷酸化的机制探讨 | 第33-39页 |
| 2.1 材料和方法 | 第33-34页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第33页 |
| 2.1.5 方法 | 第33-34页 |
| 2.2 结果 | 第34-37页 |
| 2.2.1 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中neddylation对MKK7与JNK结合的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.2 乳腺癌细胞系MCF-7中neddylation对MKK7与JNK结合的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.3 乳腺癌细胞中neddylation对MKK7激酶活性的影响 | 第36-37页 |
| 2.3 讨论 | 第37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-39页 |
| 第三部分 乳腺癌细胞中MKK7 neddylation的生物学意义研究 | 第39-53页 |
| 1 乳腺癌细胞中MKK7和JNK活性对乳腺癌细胞恶性生长的影响 | 第39-46页 |
| 1.1 材料和方法 | 第39-40页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第39页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第39页 |
| 1.1.5 方法 | 第39-40页 |
| 1.2 结果 | 第40-45页 |
| 1.2.1 乳腺癌细胞中GFP-MKK7稳定过表达对集落形成能力的影响 | 第40-41页 |
| 1.2.2 乳腺癌细胞中GFP-MKK7稳定过表达对TRAIL诱导细胞凋亡的影响 | 第41-42页 |
| 1.2.3 乳腺癌细胞中瞬时敲低MKK7对TRAIL诱导细胞凋亡的影响 | 第42-43页 |
| 1.2.4 乳腺癌细胞中瞬时敲低JNK对细胞增殖的影响 | 第43页 |
| 1.2.5 乳腺癌细胞中瞬时敲低JNK对TRAIL诱导细胞凋亡的影响 | 第43-44页 |
| 1.2.6 乳腺癌细胞中瞬时敲低UBA3对集落形成能力的影响 | 第44-45页 |
| 1.2.7 乳腺癌细胞中瞬时敲低UBA3对TRAIL诱导细胞凋亡的影响 | 第45页 |
| 1.3 讨论 | 第45-46页 |
| 2 结肠癌细胞中MKK7对恶性生长的影响和MKK7 neddylation情况鉴定 | 第46-53页 |
| 2.1 材料和方法 | 第46-48页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第46-47页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第47页 |
| 2.1.4 实验用动物 | 第47页 |
| 2.1.5 方法 | 第47-48页 |
| 2.2 结果 | 第48-51页 |
| 2.2.1 结肠癌细胞系HCT116中稳定敲低MKK7对集落形成能力的影响 | 第48页 |
| 2.2.2 结肠癌细胞系HCT116中稳定敲低MKK7对体内成瘤的影响 | 第48-51页 |
| 2.2.3 结肠癌细胞系HCT116中MKK7 neddylation情况检测 | 第51页 |
| 2.3 讨论 | 第51-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四部分 乳腺癌细胞中MKK7 neddylation E3的探索 | 第53-59页 |
| 1 材料和方法 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞株 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第53页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第53-54页 |
| 1.5 方法 | 第54页 |
| 1.5.1 银染 | 第54页 |
| 1.5.2 质谱鉴定 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-57页 |
| 2.1 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中MKK7 neddylation E3的探索 | 第54-56页 |
| 2.2 乳腺癌细胞系MDA-MB-231中RanBP2在MKK7 neddylation中的作用 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
