| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 黄孢原毛平革菌概述 | 第12-14页 |
| 1.2 黄孢原毛平革菌遗传转化 | 第14-18页 |
| 1.2.1 转化方法 | 第14-16页 |
| 1.2.2 遗传转化筛选标 | 第16-18页 |
| 1.3 黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 结构及功能 | 第18-20页 |
| 1.3.2 锰过氧化物酶的异源表达 | 第20页 |
| 1.4 丝状真菌瑞氏木霉概述 | 第20-21页 |
| 1.5 本文研究意义及内容 | 第21-22页 |
| 第二章 黄孢原毛平革菌遗传转化初探 | 第22-43页 |
| 2.1 材料和方法 | 第22-32页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第23页 |
| 2.1.3 主要实验试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 菌种保藏技术 | 第24页 |
| 2.1.5 黄孢原毛平革菌原生质体制备方法优化 | 第24-25页 |
| 2.1.6 黄孢原毛平革菌原生质体转化 | 第25-26页 |
| 2.1.7 抗性筛选标记的选择 | 第26页 |
| 2.1.8 分子生物学实验方法 | 第26-31页 |
| 2.1.9 抗性基因表达盒启动子的选择对转化效率的影响 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第32-41页 |
| 2.2.1 黄孢原毛平革菌不同生长时期的菌体对原生质体制备的影响 | 第32-34页 |
| 2.2.2 裂解酶浓度对生成原生质体的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.3 原生质体制备时稳渗剂的选择 | 第36页 |
| 2.2.4 原生质体分别对潮霉素B、抗硫胺素和除草剂Basta的敏感性 | 第36-37页 |
| 2.2.5 不同启动子的抗性基因表达盒的构建结果验证 | 第37-38页 |
| 2.2.6 潮霉素抗性转化子的筛选及分子鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.7 除草剂抗性转化子的筛选及分子鉴定 | 第39-41页 |
| 2.3 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶基因在瑞氏木霉中的表达 | 第43-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-51页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂及培养基 | 第43-44页 |
| 3.1.3 本章所用引物 | 第44-46页 |
| 3.1.4 黄孢原毛平革菌MnP2 cDNA的克隆 | 第46-47页 |
| 3.1.5 mnp2-pyrG基因表达盒的构建 | 第47-48页 |
| 3.1.6 瑞氏木霉原生质体的制备与转化 | 第48-49页 |
| 3.1.7 转化子的筛选及PCR验 | 第49页 |
| 3.1.8 转化子产锰过氧化物酶的诱导及蛋白分析 | 第49-50页 |
| 3.1.9 ABTS法分析转化子锰过氧化物酶酶活 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第51-60页 |
| 3.2.1 黄孢原毛平革菌野生型菌株ME-446 MnP2 cDNA的克隆 | 第51-52页 |
| 3.2.2 mnp2-pyrG基因表达盒的构建结果验证 | 第52-54页 |
| 3.2.3 mnp2-pyrG基因表达盒转化瑞氏木霉原生质体及转化子的筛选 | 第54-57页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE分析瑞氏木霉异源表达的锰过氧化物酶 | 第57-58页 |
| 3.2.5 ABTS法分析转化子的锰过氧化物酶酶活 | 第58-60页 |
| 3.3 小结 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附表 | 第70页 |
