| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1.1 PRRSV的研究进展 | 第14-23页 |
| 1.1.1 PRRSV的发现史 | 第14页 |
| 1.1.2 PRRS的临床症状 | 第14页 |
| 1.1.3 PRRSV的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.4 PRRSV的基因组结构及其编码的蛋白 | 第15-17页 |
| 1.1.5 PRRSV引起的免疫应答 | 第17-22页 |
| 1.1.6 PRRSV的防控和存在问题 | 第22-23页 |
| 1.1.7 抗病毒的研究进展 | 第23页 |
| 1.2 Toll样受体的研究进展 | 第23-29页 |
| 1.2.1 Toll样受体的分类及其识别的配体 | 第23-24页 |
| 1.2.2 Toll样受体信号通路 | 第24-26页 |
| 1.2.3 Toll样受体抗病毒的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.2.4 靶向Toll样受体的免疫佐剂的研究进展 | 第27-29页 |
| 1.3 本研究的背景、目的与意义 | 第29-31页 |
| 1.3.1 研究背景 | 第29页 |
| 1.3.2 研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二章 新型TLR7激动剂SZU101对PRRSV感染PAM的影响 | 第31-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第32页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.3 试剂及耗材 | 第32页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-39页 |
| 2.2.1 PAM细胞的分离与培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2 SZU101对PRRSV感染易感细胞的影响 | 第34-38页 |
| 2.2.3 RT-PCR鉴定细胞中TLR7的表达情况 | 第38-39页 |
| 2.2.4 CCK-8 试剂盒检测SZU101对细胞活性的影响 | 第39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-43页 |
| 2.3.1 IFA检测SZU101对PRRSV在易感细胞中的增殖影响 | 第39-41页 |
| 2.3.2 qPCR检测SZU101对PRRSV在PAM细胞中的增殖影响 | 第41页 |
| 2.3.3 SZU101作用PAM后显著抑制细胞上清中子代病毒的滴度 | 第41-42页 |
| 2.3.4 SZU101的细胞毒性作用检测 | 第42页 |
| 2.3.5 PRRSV易感细胞系中TLR7表达情况的测定 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 SZU101诱导TLR7介导的细胞因子抑制PRRSV增殖 | 第46-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第47页 |
| 3.1.1 细胞和病毒 | 第47页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第47页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.2.1 SZU101作用PAM后对不同毒株感染PAM的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.2 SZU101对病毒粒子感染力的直接影响 | 第48页 |
| 3.2.3 Western blot检测细胞中PRRSV的感染情况 | 第48-51页 |
| 3.2.4 SZU101作用PAM后的细胞上清的抗病毒活性检测 | 第51页 |
| 3.2.5 SZU101作用PAM后诱导的细胞因子检测 | 第51-52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 3.3.1 SZU101作用PAM后显著抑制不同PRRSV毒株的感染 | 第52-53页 |
| 3.3.2 SZU101与PRRSV相互作用后不影响PRRSV的感染力 | 第53页 |
| 3.3.3 SZU101作用PAM后的细胞上清具有抗PRRSV活性 | 第53-55页 |
| 3.3.4 SZU101作用PAM后诱导干扰素的产生 | 第55-56页 |
| 3.3.5 SZU101作用PAM后诱导炎性细胞因子的产生 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 SZU101激活TLR7-NF-κB信号通路抑制PRRSV增殖 | 第61-77页 |
| 4.1 实验材料 | 第62页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第62页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第62页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 4.2.1 主要试剂配制 | 第62-63页 |
| 4.2.2 SZU101作用PAM细胞后对转录因子NF-κB的影响 | 第63页 |
| 4.2.3 SZU101作用PAM细胞后对干扰素相关基因的诱导表达 | 第63页 |
| 4.2.4 抑制TLR7的功能对SZU101抗PRRSV作用的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.5 抑制NF-κB的活化对SZU101抗PRRSV作用的影响 | 第64页 |
| 4.2.6 Western blot检测pNF-κB p65及N蛋白水平 | 第64-65页 |
| 4.2.7 qPCR检测细胞中ORF7、细胞因子及干扰素相关基因的表达 | 第65页 |
| 4.3 实验结果 | 第65-74页 |
| 4.3.1 SZU101作用PAM细胞后激活转录因子NF-κB | 第65-66页 |
| 4.3.2 SZU101诱导PAM细胞中干扰素相关基因的上调表达 | 第66-68页 |
| 4.3.3 抑制TLR7的功能反转了SZU101对PRRSV的抑制作用 | 第68-71页 |
| 4.3.4 抑制NF-κB的活化反转了SZU101的抗PRRSV作用 | 第71-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-77页 |
| 第五章 TLR7激动剂SZU101作为PRRSV免疫佐剂的研究 | 第77-87页 |
| 5.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 5.1.1 细胞和毒株 | 第77-78页 |
| 5.1.2 试剂与耗材 | 第78页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第78页 |
| 5.1.4 实验动物 | 第78页 |
| 5.2 实验方法 | 第78-83页 |
| 5.2.1 PRRSV抗原的准备 | 第78-80页 |
| 5.2.2 实验分组 | 第80页 |
| 5.2.3 免疫原的准备 | 第80页 |
| 5.2.4 免疫前采血 | 第80-81页 |
| 5.2.5 免疫程序 | 第81页 |
| 5.2.6 小鼠血清中PRRSV特异性抗体检测 | 第81页 |
| 5.2.7 小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第81-82页 |
| 5.2.8 淋巴细胞增殖检测 | 第82-83页 |
| 5.3 实验结果 | 第83-85页 |
| 5.3.1 纯化后病毒的蛋白浓度 | 第83页 |
| 5.3.2 病毒的鉴定 | 第83-84页 |
| 5.3.3 PRRSV特异性抗体水平检测 | 第84页 |
| 5.3.4 淋巴细胞增殖检测 | 第84-85页 |
| 5.4 讨论 | 第85-86页 |
| 5.5 小结 | 第86-87页 |
| 全文总结 | 第87-88页 |
| 本研究创新点 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-111页 |
| 致谢 | 第111-114页 |
| 作者简介 | 第114页 |
