大黄鱼硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶的验证和功能鉴定
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 大黄鱼 | 第14-15页 |
| 1.1.1 分类地位与特征 | 第14页 |
| 1.1.2 在我国水产业中的地位 | 第14-15页 |
| 1.2 弧菌病 | 第15-16页 |
| 1.2.1 弧菌病症状 | 第15页 |
| 1.2.2 副溶血性弧菌 | 第15-16页 |
| 1.3 活性氧与硫氧还蛋白系统的研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 活性氧 | 第17-18页 |
| 1.3.1.1 活性氧对机体的损伤 | 第17页 |
| 1.3.1.2 活性氧的清除 | 第17-18页 |
| 1.3.2 硫氧还蛋白的研究 | 第18页 |
| 1.3.3 硫氧还蛋白还原酶的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 相关研究方法 | 第19-21页 |
| 1.4.1 RACE技术 | 第19-20页 |
| 1.4.2 实时荧光定量PCR | 第20页 |
| 1.4.3 原核表达 | 第20-21页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 大黄鱼硫氧还蛋白基因的研究 | 第22-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验材料及前期准备 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂盒及购买试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 自配试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 RNA提取 | 第25页 |
| 2.2.1.1 准备工作 | 第25页 |
| 2.2.1.2 操作步骤 | 第25页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 cDNA序列的获得和验证 | 第26-28页 |
| 2.2.4 序列全长扩增 | 第28-31页 |
| 2.2.4.1 3'端的扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.4.2 5'端的扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.4.3 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.2.5 基因表达分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 空间表达分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 副溶血弧菌刺激后的时间表达分析 | 第32页 |
| 2.2.6 原核表达 | 第32-35页 |
| 2.2.6.1 酶切位点的导入 | 第32页 |
| 2.2.6.2 双酶切反应 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 重组质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2.6.4 诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.2.6.5 纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.7 酶活性检测 | 第35-36页 |
| 2.2.8 引物序列 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-45页 |
| 2.3.1 总RNA的提取与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 ORF片段验证 | 第37页 |
| 2.3.3 生物信息学分析 | 第37-41页 |
| 2.3.3.1 序列分析 | 第37-40页 |
| 2.3.3.2 蛋白结构预测 | 第40-41页 |
| 2.3.4 基因表达分析 | 第41-43页 |
| 2.3.4.1 空间表达分析 | 第41-42页 |
| 2.3.4.2 副溶血性弧菌感染后的时间表达分析 | 第42-43页 |
| 2.3.5 原核表达 | 第43-44页 |
| 2.3.5.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.5.2 重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第44页 |
| 2.3.6 酶活性检测 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-48页 |
| 第三章 大黄鱼硫氧还蛋白还原酶基因的研究 | 第48-64页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 试剂盒及购买的试剂 | 第48页 |
| 3.1.2 自配试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 CDNA序列验证及全长的获得 | 第49页 |
| 3.2.2 基因表达分析 | 第49页 |
| 3.2.2.1 空间表达分析 | 第49页 |
| 3.2.2.2 副溶血弧菌刺激后的时间表达分析 | 第49页 |
| 3.2.3 原核表达 | 第49-50页 |
| 3.2.4 酶活性检测 | 第50-51页 |
| 3.2.4.1 DTNB还原酶活性检测 | 第50-51页 |
| 3.2.4.2 胰岛素还原酶活性检测 | 第51页 |
| 3.2.5 引物序列 | 第51-52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-62页 |
| 3.3.1 ORF片段的验证 | 第52页 |
| 3.3.2 生物信息学分析 | 第52-57页 |
| 3.3.2.1 序列分析 | 第52-55页 |
| 3.3.2.2 蛋白结构预测 | 第55-57页 |
| 3.3.3 基因表达分析 | 第57-58页 |
| 3.3.3.1 空间表达分析 | 第57页 |
| 3.3.3.2 副溶血性弧菌感染后的时间表达分析 | 第57-58页 |
| 3.3.4 原核表达 | 第58-60页 |
| 3.3.4.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3.4.2 蛋白诱导表达和纯化 | 第59-60页 |
| 3.3.5 酶活性检测 | 第60-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 小结 | 第64-66页 |
| 4.1 全文小结 | 第64页 |
| 4.1.1 硫氧还蛋白 | 第64页 |
| 4.1.2 硫氧还蛋白还原酶 | 第64页 |
| 4.2 本文创新点 | 第64页 |
| 4.3 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在校期间发表的学术论文以及研究成果 | 第72页 |
