| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 综述进展 | 第12-18页 |
| 1.1 丹参研究现状 | 第12-13页 |
| 1.1.1 丹参的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.2 丹参药用活性成分 | 第12-13页 |
| 1.1.3 丹参药理作用 | 第13页 |
| 1.1.4 丹参资源利用现状 | 第13页 |
| 1.2 miR156研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 miRNAs的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miR156在拟南芥中研究近况 | 第14-15页 |
| 1.2.3 赤霉素、蔗糖等对miR156表达的影响 | 第15-16页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 第2章 丹参miR156前体序列的克隆及表达分析 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第18页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 材料方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 材料处理方法 | 第19页 |
| 2.2.2 核酸提取 | 第19页 |
| 2.2.3 丹参miR156前体序列的克隆 | 第19页 |
| 2.2.4 Sm-MIR156a生物信息学的分析 | 第19-20页 |
| 2.2.5 Sm-MIR156a基因的表达模式分析 | 第20页 |
| 2.3 结果及分析 | 第20-27页 |
| 2.3.1 Sm-MIR156a基因的全长序列的获得 | 第20-21页 |
| 2.3.2 Sm-MIR156a系统发育比较 | 第21页 |
| 2.3.3 Sm-MIR156a二级结构的预测及成熟序列碱基保守性分析 | 第21-22页 |
| 2.3.4 Sm-MIR156a基因的启动子区分析 | 第22-23页 |
| 2.3.5 Sm-MIR156a靶标预测 | 第23-24页 |
| 2.3.6 Sm-MIR156a基因的表达模式分析 | 第24-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第3章 丹参转基因阳性株系的获得、靶标验证、鲜重、叶绿素含量的测定 | 第28-40页 |
| 3.1 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第28页 |
| 3.1.3 试剂与药品 | 第28-29页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 3.2.1 Sm-MIR156a基因干涉载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.2 叶盘转化法转化丹参 | 第30-31页 |
| 3.2.3 转基因株系分子水平检测 | 第31-32页 |
| 3.2.4 转基因株系靶标的验证 | 第32-33页 |
| 3.2.5 转基因株系鲜重和叶绿素含量的测定 | 第33页 |
| 3.3 结果及分析 | 第33-37页 |
| 3.3.1 Sm-MIR156a基因干涉载体的验证 | 第33-34页 |
| 3.3.2 转基因株系DNA水平检测 | 第34页 |
| 3.3.3 转基因株系转录水平检测 | 第34-35页 |
| 3.3.4 转基因株系靶标验证 | 第35-36页 |
| 3.3.5 转基因株系鲜重和叶绿素含量的测定 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-40页 |
| 第4章 丹参干涉株系次生代谢产物含量检测及关键酶基因的表达变化 | 第40-52页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第40页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂及药品 | 第40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 转基因株系总酚总黄酮含量的测定 | 第40-42页 |
| 4.2.2 转基因丹参株系根中次生代谢产物含量的测定 | 第42页 |
| 4.2.3 HPLC条件 | 第42-43页 |
| 4.2.4 线性关系和检测范围 | 第43页 |
| 4.2.5 转基因株系次生代谢途径关键酶基因的表达水平检测 | 第43-44页 |
| 4.3 结果及分析 | 第44-50页 |
| 4.3.1 转基因株系中总酚酸含量测定 | 第44-45页 |
| 4.3.2 转基因株系中总黄酮含量测定 | 第45页 |
| 4.3.3 干涉丹参根中迷迭香酸、丹酚酸B含量的测定 | 第45-46页 |
| 4.3.4 丹参酮I、丹参酮IIA及隐丹参酮含量测定 | 第46-47页 |
| 4.3.5 干涉株系中次生代谢途径相关基因的表达变化 | 第47-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第5章 Sm-MIR156a异源过表达烟草的研究 | 第52-64页 |
| 5.1 | 第52页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.2 菌株与载体 | 第52页 |
| 5.1.3 试剂与药品 | 第52页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 5.2.1 Sm-MIR156a过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 5.2.2 农杆菌GV3101介导转化烟草 | 第53-54页 |
| 5.2.3 转基因烟草分子水平检测 | 第54-55页 |
| 5.2.4 转基因烟草Nb-SPLs表达水平的检测 | 第55页 |
| 5.2.5 转基因烟草表观形态的检测 | 第55页 |
| 5.2.6 转基因烟草烟碱等次生代谢产物的含量测定 | 第55-57页 |
| 5.2.7 转基因烟草独脚金内酯合成途径关键酶基因的检测 | 第57页 |
| 5.3 结果及分析 | 第57-62页 |
| 5.3.1 Sm-MIR156a基因过表达载体的验证 | 第57-58页 |
| 5.3.2 转基因烟草DNA水平检测 | 第58页 |
| 5.3.3 转基因烟草转录水平检测 | 第58-59页 |
| 5.3.4 转基因烟草Nb-SPLs表达检测 | 第59-60页 |
| 5.3.5 转基因烟草表观形态的检测 | 第60页 |
| 5.3.6 转基因烟草次生代谢产物的测定 | 第60-61页 |
| 5.3.7 转基因烟草独脚金内酯合成途径关键酶基因的检测 | 第61-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第6章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第76页 |
