| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第12-38页 |
| 第一节 γ-聚谷氨酸及其应用 | 第12-17页 |
| 1.1.1 聚谷氨酸及γ-聚谷氨酸 | 第12-13页 |
| 1.1.2 γ-聚谷氨酸的合成 | 第13页 |
| 1.1.3 γ-聚谷氨酸的功能 | 第13-14页 |
| 1.1.4 γ-聚谷氨酸的合成、降解及调控机制 | 第14-16页 |
| 1.1.5 γ-聚谷氨酸的应用 | 第16-17页 |
| 第二节 提高γ-聚谷氨酸产量的方法 | 第17-21页 |
| 1.2.1 发酵条件优化策略 | 第17-19页 |
| 1.2.2 基因工程改造策略 | 第19-21页 |
| 第三节 工业微生物菌株改造策略 | 第21-35页 |
| 1.3.1 确立研究方案 | 第22-23页 |
| 1.3.2 代谢通路的构建 | 第23-24页 |
| 1.3.3 代谢通路的优化 | 第24-26页 |
| 1.3.4 提高细菌基础代谢能力 | 第26-29页 |
| 1.3.5 代谢通路的改造 | 第29-32页 |
| 1.3.6 优化辅因子平衡 | 第32-33页 |
| 1.3.7 提高细胞耐受 | 第33-34页 |
| 1.3.8 提高产物（合成酶）分泌 | 第34页 |
| 1.3.9 培养基优化及放大培养 | 第34-35页 |
| 第四节 本研究的意义、目的及技术路线 | 第35-38页 |
| 1.4.1 研究意义和目的 | 第35-36页 |
| 1.4.2 研究的技术路线 | 第36-38页 |
| 第二章 通过模块化通路改造策略提高解淀粉芽胞杆菌γ-PGA产量 | 第38-104页 |
| 第一节 实验材料 | 第39-52页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第39-46页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第46-49页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第49-50页 |
| 2.1.4 培养基及溶液 | 第50-52页 |
| 第二节 实验方法 | 第52-68页 |
| 2.2.1 细菌基因组提取 | 第52页 |
| 2.2.2 质粒DNA的提取 | 第52-53页 |
| 2.2.3 DNA片段回收 | 第53页 |
| 2.2.4 细菌RNA提取，反转录及定量PCR | 第53-54页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第54-55页 |
| 2.2.6 质粒构建 | 第55-57页 |
| 2.2.7 质粒前处理 | 第57页 |
| 2.2.8 E.coli感受态制备及转化 | 第57-58页 |
| 2.2.9 B.amyloliquefaciens菌株感受态制备及转化 | 第58页 |
| 2.2.10 基因敲除菌株的构建 | 第58-59页 |
| 2.2.11 基因插入菌株的构建 | 第59-60页 |
| 2.2.12 摇瓶发酵实验 | 第60页 |
| 2.2.13 5-L罐发酵实验 | 第60-61页 |
| 2.2.14 粘度测定 | 第61-62页 |
| 2.2.15 残糖测定 | 第62页 |
| 2.2.16 γ-PGA产物纯化及产量测定 | 第62-63页 |
| 2.2.17 γ-PGA产物分子量测定 | 第63页 |
| 2.2.18 γ-PGA产物纯度测定 | 第63页 |
| 2.2.19 乙酸含量测定 | 第63-64页 |
| 2.2.20 乳酸含量测定 | 第64页 |
| 2.2.21 扫描电镜 | 第64页 |
| 2.2.22 细菌生物被膜形成 | 第64-65页 |
| 2.2.23 γ-PGA合成酶Western blot分析 | 第65-67页 |
| 2.2.24 GDH和GS酶活检测 | 第67页 |
| 2.2.25 sRNA的设计与表达 | 第67-68页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第68-102页 |
| 2.3.1 γ-PGA降解酶基因敲除对γ-PGA合成及细胞形态维持的影响 | 第68-79页 |
| 2.3.2 tasA及胞外蛋白酶基因敲除对γ-PGA合成影响 | 第79-83页 |
| 2.3.3 改造细菌氧化呼吸对γ-PGA合成影响 | 第83-85页 |
| 2.3.4 细菌多糖基因敲除对γ-PGA合成影响 | 第85-90页 |
| 2.3.5 阻断乙酸和乳酸合成对γ-PGA合成影响 | 第90-93页 |
| 2.3.6 敲除降解酶基因 | 第93-95页 |
| 2.3.7 敲除自诱导因子合成基因对γ-PGA合成影响 | 第95-97页 |
| 2.3.8 过表达pgsBCA对γ-PGA合成影响 | 第97-99页 |
| 2.3.9 通过sRNA调控胞内谷氨酸合成提高γ-PGA产量 | 第99-102页 |
| 第四节 本章小结 | 第102-104页 |
| 第三章 通过改造蔗糖代谢途径提高γ-PGA产量 | 第104-128页 |
| 第一节 实验材料 | 第105-110页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物 | 第105-109页 |
| 3.1.2 药品及试剂 | 第109-110页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第110页 |
| 3.1.4 培养基和溶液 | 第110页 |
| 第二节 实验方法 | 第110-111页 |
| 3.2.1 蔗糖磷酸酶表达检测 | 第110-111页 |
| 3.2.2 代谢产物测定 | 第111页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第111-127页 |
| 3.3.1 构建组成型表达蔗糖代谢途径 | 第111-114页 |
| 3.3.2 能量节约型蔗糖代谢途径的构建 | 第114-127页 |
| 第四节 本章小结 | 第127-128页 |
| 第四章 通过改造谷氨酸合成途径提高γ-PGA产量 | 第128-150页 |
| 第一节 实验材料 | 第130-134页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和引物 | 第130-133页 |
| 4.1.2 药品及试剂 | 第133-134页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第134页 |
| 4.1.4 培养基和溶液 | 第134页 |
| 第二节 实验方法 | 第134-135页 |
| 4.2.1 β-半乳糖苷酶酶活测定 | 第134-135页 |
| 4.2.2 odhAB启动子改造方法 | 第135页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第135-149页 |
| 4.3.1 抑制EMP途径提高胞内还原力合成 | 第135-137页 |
| 4.3.2 能量节约型谷氨酸合成途径的引入 | 第137-141页 |
| 4.3.3 引入代谢开关控制代谢流 | 第141-149页 |
| 第四节 本章小结 | 第149-150页 |
| 第五章 总结与展望 | 第150-154页 |
| 第一节 全文总结 | 第150-152页 |
| 第二节 展望 | 第152-154页 |
| 参考文献 | 第154-176页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文 | 第176-177页 |
