| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 Lhx3基因结构及其蛋白亚型 | 第11-12页 |
| 1.2 Lhx3在垂体中的功能研究进展 | 第12-17页 |
| 1.3 Lhx3在内耳中的研究进展 | 第17页 |
| 1.4 Lhx3在视网膜中的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 Lhx3在脊椎中的研究进展 | 第18-19页 |
| 2 实验内容与设计 | 第19-22页 |
| 2.1 实验目的与意义 | 第19页 |
| 2.2 实验内容 | 第19-20页 |
| 2.3 实验流程图 | 第20-21页 |
| 2.4 基因打靶小鼠示意图 | 第21-22页 |
| 3 实验材料与方法 | 第22-38页 |
| 3.1 实验动物饲养与鉴定 | 第22-23页 |
| 3.1.1 实验小鼠 | 第22页 |
| 3.1.2 基因型鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2 实验材料处理 | 第23-24页 |
| 3.3 实验方法 | 第24-31页 |
| 3.3.1 小鼠构建 | 第24-27页 |
| 3.3.2 PCR产物切胶回收 | 第27页 |
| 3.3.3 TA克隆:连接与转化 | 第27-28页 |
| 3.3.4 菌落筛选、酶切与测序 | 第28页 |
| 3.3.5 酶切产物线性化产物酚氯仿纯化 | 第28页 |
| 3.3.6 免疫组化 | 第28-29页 |
| 3.3.7 QIAGEN质粒大提 | 第29-31页 |
| 3.4 胚胎干细胞培养 | 第31-34页 |
| 3.4.1 胚胎干细胞传代 | 第31-32页 |
| 3.4.2 胚胎干细胞冻存 | 第32页 |
| 3.4.3 干细胞解冻 | 第32页 |
| 3.4.4 DNA电击法转入胚胎干细胞 | 第32-33页 |
| 3.4.5 干细胞克隆子的挑选 | 第33页 |
| 3.4.6 96孔板中干细胞的传代,冻存和解冻 | 第33页 |
| 3.4.7 小鼠胚胎成纤维细胞的纯化 | 第33-34页 |
| 3.5 显微注射和胚胎移植 | 第34-35页 |
| 3.5.1 受体胚胎准备 | 第34页 |
| 3.5.2 显微注射 | 第34-35页 |
| 3.6 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 3.7 实验试剂与配方 | 第36-38页 |
| 3.7.1 干细胞培养试剂 | 第36-37页 |
| 3.7.2 免疫荧光试剂及抗体 | 第37页 |
| 3.7.3 小鼠用药 | 第37-38页 |
| 4 实验结果 | 第38-48页 |
| 4.1 Lhx3~(GFP)和Lhx3~(loxp)小鼠的构建 | 第38-40页 |
| 4.2 Lhx3及GFP报告基因在垂体中的表达模式 | 第40页 |
| 4.3 Lhx3及GFP报告基因在视网膜中的表达模式 | 第40-42页 |
| 4.4 Lhx3及GFP报告基因在脊椎中的表达模式 | 第42-43页 |
| 4.5 Lhx3及GFP报告基因在内耳中的表达模式 | 第43-46页 |
| 4.6 Lhx3条件性敲除的实现 | 第46-48页 |
| 5 总结与讨论 | 第48-50页 |
| 5.1 实验总结 | 第48页 |
| 5.2 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |
