| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 α-酮酸概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 芳香族α-酮酸及其衍生物 | 第15-16页 |
| 1.1.2 α-酮酸的合成方法 | 第16-18页 |
| 1.2 膜结合L-氨基酸脱氨酶概述 | 第18-23页 |
| 1.2.1 膜结合L-氨基酸脱氨酶的异源表达 | 第20-21页 |
| 1.2.2 膜结合L-氨基酸脱氨酶的晶体结构 | 第21-23页 |
| 1.3 研究目的和主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 膜结合L-氨基酸脱氨酶工程菌的构建 | 第25-42页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 主要实验设备和材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 质粒和菌种 | 第25-26页 |
| 2.2.2 酶及分子生物学试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 化学试剂 | 第26页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.2.5 主要实验设备 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.3.1 mlaad基因获取与质粒构建流程 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.3 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第34页 |
| 2.3.4 mL-AAD工程菌表观催化活力的定义 | 第34页 |
| 2.3.5 分析测定方法 | 第34-35页 |
| 2.3.6 不同表达策略的比较 | 第35页 |
| 2.3.7 生长曲线的测定 | 第35页 |
| 2.3.8 宿主细胞的优化 | 第35页 |
| 2.3.9 诱导剂浓度的优化 | 第35-36页 |
| 2.3.10 mL-AAD工程菌底物谱分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-41页 |
| 2.4.1 重组质粒pET-20b-mlaad和pET-28a-mlaad的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.2 不同表达策略对菌体表观催化活力的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.3 过表达mL-AAD对宿主细胞的影响 | 第38-39页 |
| 2.4.4 诱导剂浓度的优化 | 第39-40页 |
| 2.4.5 mL-AAD工程菌底物谱分析 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 膜结合L-氨基酸脱氨酶工程菌制备苯丙酮酸及苯乳酸的研究 | 第42-54页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 主要实验设备和药品 | 第43页 |
| 3.2.1 主要实验设备 | 第43页 |
| 3.2.2 主要实验药品 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.3.1 BL21(DE3)-pETDuet-dhd-fdh重组菌株的构建 | 第43-45页 |
| 3.3.2 全细胞催化剂的制备 | 第45页 |
| 3.3.3 分析测定方法 | 第45页 |
| 3.3.4 BL21(DE3)-pET-28a-mlaad制备PPA反应条件优化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 PPA的制备 | 第46页 |
| 3.3.6 BL21(DE3)-pETDuet-dhd-fdh制备PLA反应条件优化 | 第46页 |
| 3.3.7 PLA的制备 | 第46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.4.1 BL21(DE3)-pET-28a-mlaad制备PPA反应条件优化 | 第46-49页 |
| 3.4.2 PPA的制备 | 第49页 |
| 3.4.3 BL21(DE3)-pETDuet-dhd-fdh重组菌株的构建 | 第49-50页 |
| 3.4.4 BL21(DE3)-pETDuet-dhd-fdh制备PLA反应条件优化 | 第50-52页 |
| 3.4.5 PLA的制备 | 第52-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 膜结合L-氨基酸脱氨酶工程菌制备3,4-二羟基苯丙酮酸及丹参素的研究 | 第54-67页 |
| 4.1 引言 | 第54-55页 |
| 4.2 实验设备和药品 | 第55页 |
| 4.2.1 主要实验设备 | 第55页 |
| 4.2.2 主要实验药品 | 第55页 |
| 4.2.3 实验菌种 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 4.3.1 BL21(DE3)-pETDuet-hppr-fdh及BL21(DE3)-pETDuet-dldh-fdh重组菌株的构建 | 第55-58页 |
| 4.3.2 全细胞催化剂的制备 | 第58页 |
| 4.3.3 BL21(DE3)-pET-28a-mlaad制备DHPPA反应条件优化 | 第58页 |
| 4.3.4 DHPPA的制备 | 第58-59页 |
| 4.3.5 BL21(DE3)-pETDuet-dldh-fdh制备SAA反应条件优化 | 第59页 |
| 4.3.6 SAA的制备 | 第59页 |
| 4.3.7 分析测定方法 | 第59-60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-66页 |
| 4.4.1 BL21(DE3)-pET-28a-mlaad制备DHPPA反应条件优化 | 第60-62页 |
| 4.4.2 DHPPA的制备 | 第62页 |
| 4.4.3 BL21(DE3)-pETDuet-hppr-fdh和BL21(DE3)-pETDuet-dldh-fdh重组菌株的构建 | 第62-64页 |
| 4.4.4 B121(DE3)-pETDuet-dldh-fdh制备SAA反应条件优化 | 第64-65页 |
| 4.4.5 SAA的制备 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论和展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录1 | 第76-77页 |
| 附录2 | 第77-78页 |
| 附录3 | 第78-79页 |
| 附录4 | 第79-80页 |
| 硕士期间科研成果及奖项 | 第80页 |
