| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 白腐真菌简介 | 第10页 |
| 1.2 锰过氧化物酶(MnP) | 第10-11页 |
| 1.2.1 锰过氧化物酶的性质 | 第10页 |
| 1.2.2 锰过氧化物酶的催化机理 | 第10-11页 |
| 1.3 白腐真菌研究的国内外进展 | 第11-15页 |
| 1.3.1 MnP的发酵调控研究 | 第11-13页 |
| 1.3.2 分子生物学水平研究 | 第13-15页 |
| 1.4 农杆菌介导的真菌的转染 | 第15-16页 |
| 1.4.1 农杆菌简介 | 第15页 |
| 1.4.2 转染机理 | 第15-16页 |
| 1.4.3 影响转化的因素 | 第16页 |
| 1.5 透明颤菌血红蛋白VHb | 第16-18页 |
| 1.5.1 VHb的作用机制 | 第17页 |
| 1.5.2 VHb的应用 | 第17-18页 |
| 1.6 本课题的研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第2章 黄孢原毛平革菌的产MnP的研究 | 第19-28页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 孢子制备 | 第20页 |
| 2.3.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.3.3 培养方式 | 第21页 |
| 2.3.4 各种溶液的配置 | 第21页 |
| 2.3.5 蛋白样品的处理 | 第21页 |
| 2.3.6 MnP的测定 | 第21-22页 |
| 2.3.7 葡萄糖及铵根离子的测定方法 | 第22-23页 |
| 2.3.8 干重的测定 | 第23页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第23-27页 |
| 2.4.1 接种量对MnP的影响 | 第23页 |
| 2.4.2 Tween 80对MnP的影响 | 第23-24页 |
| 2.4.3 碳源及氮源的添加量对MnP的影响 | 第24-25页 |
| 2.4.4 酶的分泌方式 | 第25-26页 |
| 2.4.5 剪切力对MnP的影响 | 第26-27页 |
| 2.5 本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 双元载体的构建 | 第28-44页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第28页 |
| 3.2.2 试验试剂及仪器 | 第28-29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 3.3.1 培养基等的配置 | 第29页 |
| 3.3.2 DH5α感受态制备 | 第29页 |
| 3.3.3 DH5α的转化 | 第29页 |
| 3.3.4 载体构建所用引物 | 第29-30页 |
| 3.3.5 双元载体的构建流程 | 第30-33页 |
| 3.3.6 分子操作 | 第33页 |
| 3.4 结果 | 第33-43页 |
| 3.4.1 双元载体pCAMBIA1300-vgb的构建 | 第33-36页 |
| 3.4.2 双元载体pCAMBIA1300-pki-vgb的构建 | 第36-39页 |
| 3.4.3 双元载体pCAMBIA1300-gpd-vgb的构建 | 第39-42页 |
| 3.4.4 双元载体pCAMBIA1300-gpdA-vgb的构建 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 根癌农杆菌介导的真菌转染 | 第44-54页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第44页 |
| 4.2.2 实验试剂与仪器 | 第44页 |
| 4.2.3 PCR材料 | 第44-45页 |
| 4.2.4 RT-PCR检测vgb基因的转录 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 双元载体转化根癌农杆菌 | 第45页 |
| 4.3.2 根癌农杆菌转染里氏木霉和黄孢原毛平革菌 | 第45-46页 |
| 4.3.3 RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第47-53页 |
| 4.4.1 根癌农杆菌抗性筛选 | 第47页 |
| 4.4.2 黄孢原毛平革菌及里氏木霉抗性实验 | 第47-48页 |
| 4.4.3 双元载体转化根癌农杆菌 | 第48-50页 |
| 4.4.4 根癌农杆菌转染真菌 | 第50页 |
| 4.4.5 里氏木霉转化子鉴定 | 第50-52页 |
| 4.4.6 RT-PCR检测vgb基因的转录 | 第52页 |
| 4.4.7 转化子遗传稳定性鉴定 | 第52-53页 |
| 4.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第5章 里氏木霉转化子与野生菌的差异对比 | 第54-59页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 5.2.1 菌株 | 第54页 |
| 5.2.2 试剂 | 第54页 |
| 5.2.3 培养基 | 第54-55页 |
| 5.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 5.3.1 培养方式 | 第55页 |
| 5.3.2 干重测定 | 第55页 |
| 5.3.3 DNS法测葡萄糖浓度 | 第55-56页 |
| 5.3.4 滤纸酶活(FPA)的测定 | 第56页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第56-58页 |
| 5.4.1 干重 | 第56-57页 |
| 5.4.2 滤纸酶活(FPA) | 第57-58页 |
| 5.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第6章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 6.1 结论 | 第59页 |
| 6.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
